DRD2基因标志性SNP和单体型的挑选及其与PTSD易患性的关联及机制研究

研究证实PTSD具有遗传易感性，主要与候选基因的多态性相关。DRD2是中枢神经系统多巴胺能信号通路的重要受体，DRD2基因改变是PTSD发生的重要分子机制。前期生物信息学分析发现，在中国汉族人群中共有79个SNPs位点，挑选出14个标签SNPs。本课题以整个基因为单位，研究DRD2基因所有SNPs与PTSD易患性的内在联系。首先利用HapMap数据库构建中国汉族人DRD2基因单倍域，挑选出每个单倍域内有代表性的标签SNP及单体型；再利用高通量Pyrosequencing定量遗传分析系统，分析DRD2基因标签SNP及单体型在中国健康汉族人群中的分布；利用定点突变等技术分析标签SNP及单倍型的生物学功能；收集PTSD病例及创伤对照组患者DNA标本，观察功能性标签SNP及单倍型与PTSD易患性的关联性，为PTSD的预警诊断及早期针对性干预提供有效的基因标志；为临床多基因疾病遗传学研究提供新思路。

本项目通过健康体检共收集健康人血标本497例；在多家精神卫生中心收集PTSD病例337例，用全血基因组DNA及RNA提取试剂盒提取了所有样本的全血基因组DNA及部分PTSD病例的RNA及血清。然后通过生物信息学分析，挑选了15个标签SNP（rs10891556、rs12574471、rs1799978、rs2075652、rs2242591、rs2734833，rs4436578，rs4460839，rs4586205，rs4648317，rs4648318，rs4648319，rs6279，rs7131056 ，rs1800479）；同时挑选了CAT基因的6个标签SNP（rs208679、rs10836233、rs2300182、rs769217、rs7104301、rs7949972）。对所收集的834例样本进行了DRD2基因的15个SNP位点分型；对287例健康人和173例PTSD病例进行了CAT基因6个标签SNP位点分型。样本分型的成功率达99.6%。通过对337例PTSD病人与497例健康志愿者进行DRD2基因的临床关联研究；以及173例PTSD病人与287例健康志愿者进行CAT基因的病例-对照相关性研究。结果显示：CAT基因的6个标签SNP位点均与PTSD发生的易患性无关；而DRD2基因的rs2075652和rs7131056两个位点与PTSD发生的易患性相关，两个位点均是突变后可增加发病风险；单倍型分析结果发现，单倍型GTGATCGCGCAGGCG与PTSD发生的易患性相关，该可增加发病风险。通过荧光素酶载体构建、实时定量PCR以及ELISA等实验分析与PTSD易患性相关SNP的功能，结果发现：rs2075652不仅可以影响荧光素酶活性表达，而且影响DRD2S的表达水平，说明rs2075652还可以影响选择性剪切；而rs7131056不具备这些功能。所有SNP位点都不影响血清DRD2、TNF-a及IL-6的表达水平，说明DRD2基因的SNP位点并不影响PTSD病人体内的炎症水平。本研究达到了预期的研究目标，筛选出rs2075652和rs7131056及单倍型GTGATCGCGCAGGCG可作为PTSD的早期预警诊断的基因标志；同时建立了PTSD的数据库，为以后PTSD的遗传学研究提供了研究基础，也为其它临床多基因的遗传学研究提供了新思路。