日粮PUFA对中华花龟卵巢发育的影响及调节机制

The scale of turtle captivity is increasing as a new hot spot of special aquaculture. However, there are still some important problems unsloved, such as deficiency of some hatchlings and lacking of special research on turtle feed and nutritional requirement. So the research on reproducitonal nutrition especially on fatty acid is very important and ergent for higher quality of turtle reproduction. Thus, in this program, the effects of dietary polyunsatured fatty acid (PUFA) on fatty acid metabolism during the periods of different ovarian developments in Ocadia sinensis will be studied, which includes the histological structure and ultrastructure of intestine, the activities of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) and malic enzyme (ME), and mRNA of fatty acid binding protein (FABP), to verify the relationship between dietary PUFA and vitellogenesis. Also the effect of serum sex steroid homone and gonadotropin-releasing hormone (GnRH) including follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) levels on ovarian development at different dietary PUFA levels will be studied. On these bases, the gene expression of estrogen receptor alpha and ovarian p450 aromatase at different dietary PUFA levels will be analyzed, in order to reveal the molecular mechanism of the regulation of dietary PUFA on sex steroid hormone secretion. The results could provide scientific basis for revealing the regulatory mechanism of dietary PUFA on ovarian development in view of fatty acid metabolism and sex steroid hormone secretion in freshwater turtle, and for studying the nutrient requirement of fatty acid during different stages of ovarian developments in freshwater turtle.

龟类养殖作为我国特种水产养殖新热点，养殖规模不断发展壮大。但目前养殖场种苗短缺、专用亲龟配合饲料缺乏等现象严重。生殖营养学的研究可望为实现龟类的高质量繁育提供新的思路，而脂质营养是其中的研究热点。本研究将基于脂肪酸吸收、代谢和转运角度从组织、细胞和分子层面分别研究日粮PUFA对中华花龟(Ocadia sinensis)肠道组织结构及超微结构、脂肪酸代谢酶活性、脂肪酸结合蛋白mRNA表达的影响及其与卵黄积累的相互关系；并研究卵巢在PUFA介导下性类固醇激素和GnRH 对其发育的影响及调控，在此基础上，进一步研究日粮PUFA对组织中雌激素受体与卵巢芳香化酶基因mRNA的表达情况以探讨PUFA影响性类固醇激素分泌的分子基础。研究成果可揭示日粮PUFA对龟类脂类代谢及性类固醇激素分泌的调节机制，为开展脂肪酸营养调控龟类卵巢发育的内在机制研究奠定基础，为龟类卵巢发育期脂肪酸的需求研究提供理论依据。

我国龟类养殖现已成为仅次于毛皮业的第二大特色产殖业。但在龟类饲料配制方面，随着鱼油资源日益短缺、易被氧化而不利于长期保存等特点，鱼油资源替代的研究显得尤为迫切。已有研究表明，日粮中不饱和脂肪酸的种类和含量将影响动物的脂质代谢与卵黄发生，因此，本研究以寻求最低鱼油消耗以保持中华花龟最佳繁殖力为着眼点，选取了雌性成体中华花龟（Mauremys sinensis）（四龄，体重1557±307 g），按日粮中豆油和鱼油添加比例不同随机分成4组：Ⅰ组（全鱼油，0S:3F）、Ⅱ组（豆油替代33.3%鱼油，1S:2F）、Ⅲ组（豆油替代66.7%鱼油，2S:1F）和Ⅳ组（豆油替代100%鱼油，3S:0F），饲喂一年；分别在卵黄发生前、中、后期以及产卵期从每组中随机选取6只检测组织中脂肪代谢及卵黄发生相关指标。研究结果表明：根据卵黄发生期血清VTG含量及卵巢组织结构发育特征，将一年饲养期分为卵黄发生前（5－7月）、中（7－11月）、后期（11月至次年3月）以及产卵期（3－5月）。卵黄发生中后期以外源性卵黄合成为主，在此期间胰脂肪酶活力（PL）、激素敏感性脂酶（HSL）的活力、肝脏脂肪酸合成酶（FAS）活力均达到峰值，这标志着肠道对外源脂质的消化能力以及分解能力增强，内源脂质分解减弱，肝脏的脂质合成代谢活跃。与此同时，促性腺激素释放激素GnRH含量显著下降，从而使促卵泡成熟激素（FSH）、黄体生成激素（LH）和雌二醇（E2）含量持续升高。而肝型脂肪酸结合蛋白L-FABP、雌激素受体ERa以及芳香化酶CYP19a1a基因表达量亦在卵黄发生中后期达到最大值。综合各指标而言，在中华花龟中添加一定量的豆油是可行的，以2S:1F表现出较适宜的替代效应。研究结果为解决中华花龟不同的卵黄发生期合适的脂质营养的供给提供了理论依据，也为龟类的饲料配制提供了实践指导。进一步的研究可围绕2S:1F来设置更多的替代比例组，以探究龟类中脂肪的适宜添加量及豆油替代鱼油在龟类中的最佳的替代比例。