针康法调控脑缺血后神经血管单元及促进脑内微血管重塑的相关分子机制研究

Based on the clinical effectuation of cluster needling of scalp acupuncture combined with rehabilitation(Tang's Approach), the neurovascular unit is introduced. From the angle of dynamic changes of the neurovascular unit after ischemic stroke, we will discuss the mechanism of Tang's Approach in promoting neurological function recovery after ischemic stroke. In the frame of the neurovascular unit, we propose the angiogenic switch. In order to find the key point of renewing of blood vessel,we will analyze the protein and gene expression of promoted factors and inhibited factors by RT-PCR and Western blot , which can form new blood vessels; The specific block agent of MEK introduced, we will analyze the protein and gene expression of key molecules, which can regulate the Raf/MEK/ERK signal pathway, by RT-PCR and Western blot. From the angle of signal transfer, we will elaborate the molecular mechanisms of Tang's Approach in promoting recovery of blood vessel. We will verify the hypothesis that Tang's Approach can regulate Raf/MEK/ERK signal pathway, and promote the recovery of microvascular in ischemic region , protecting the neurovascular unit. given basis theory for the clinical application of Tang's Approach.

基于针康法的临床疗效，首次引入神经血管单元概念，从脑组织缺血后神经血管单元动态变化的角度，探讨针康法促进脑缺血后神经功能恢复的作用机制。在神经血管单元这一框架下，提出"血管生成开关"，拟采用RT-PCR法和Western blot法对血管生成促进因子和抑制因子的蛋白、基因表达进行分析，探寻针康法促进血管再生的关键点；引入MEK特异性阻断剂，采用RT-PCR法和Western blot法对血管内皮生长因子介导的Raf/MEK/ERK信号通路上关键分子的蛋白、基因表达进行分析，从信号转导角度，阐释针康法促进脑缺血后血管重塑的分子机制。验证"针康法调控Raf/MEK/ERK信号通路，促进缺血区微血管重塑，多角度、多途径保护脑缺血后神经血管单元这一假说，为针康法临床推广应用提供理论依据。

本项目基于针康法的临床疗效，在神经血管单元框架内，从微血管重塑角度，探讨针康法促进脑缺血后神经功能恢复的作用机制。采用改良神经缺损评分评估大鼠神经功能，免疫组化法观察神经血管单元的动态变化及微血管密度，电镜观察缺血区大脑皮层微血管内皮的超微结构，Western blot及RT-PCR检测缺血区大脑皮层血管生成促进因子（VEGF、aFGF 及 bFGF）和抑制因子（血管抑制素、血小板因子 4 及凝血酶敏感蛋白 1）蛋白和基因表达；引入MEK 特异性阻断剂 PD98059，运用Western blot和 RT-PCR技术检测各实验组血管内皮生长因子受体（Flt-1 及 Flk-1）、胞外信号调节激酶（EPK）、磷酸化的胞外信号调节激酶（p-EPK）蛋白和基因的表达。研究发现：针康法可以促进脑缺血后神经功能重建；针康法通过下调缺血脑组织GFAP表达，上调缺血脑组织VEGF、LN、NeuN表达，增加微血管的数目，维持血管、神经元、血脑屏障的动态平衡，促进脑缺血后神经血管单元功能重塑；针康法通过上调缺血脑组织血管再生促进因子aFGF、bFGF蛋白表达，下调血管再生抑制因子PF4、TSP-1蛋白表达，降低血管内皮的损伤，维持“血管生成开关”平衡，促进缺血脑组织微血管再生；针康法通过促进ERK磷酸化，激活ERK 信号通路。此外，针康法能促进脑缺血大鼠运动功能的恢复，缩小脑梗死体积，促进脑缺血区皮层Nestin、ET- β 、Ang-1、GAP-43蛋白表达，降低Nogo-A、RhoA、ROCK-Ⅱ蛋白的表达。这些结果为针康法的临床推广与应用提供了坚实的理论支撑。项目资助发表核心论文7篇，已录用待发表2篇，获专利2项，科技成果奖1项。培养研究生10名，其中8名已经取得硕士学位，1名已经取得博士学位，1名博士在读。