miR-7调控EGFR抑制上皮性卵巢癌转移的机制研究

上皮性卵巢癌（EOC）的远处转移是造成其五年生存率低的主要原因之一，EGFR及其下游信号通路激活可促进EOC转移。miRNA具有调节细胞发育、分化、增殖、凋亡等生理过程的作用。已有报道miR-7可直接作用于EGFR mRNA 3'-UTR区，从而抑制EGFR mRNA和蛋白表达水平。我们发现EOC细胞表达miR-7，且miR-7表达与EOC转移能力及EGFR表达负相关，故设想miR-7可能通过调控EGFR及其下游的某些信号通路活化和/或诱导EOC细胞的EMT来抑制EOC转移。本课题拟通过病例研究、体外细胞培养和体内动物实验来明确miR-7在EOC组织中表达情况；阐明miR-7是否通过调控EOC细胞上EGFR表达及其下游信号通路活化和/或诱导EOC细胞的EMT来抑制EOC转移的机制；研究调控miR-7表达在抑制EOC转移中的作用，寻找能有效抑制EOC转移的miR作为应用于临床的药物。

上皮性卵巢癌的远处转移是造成其五年生存率低的主要原因之一，EGFR及其下游信号通路激活可促进 EOC 转移。miRNA 具有调节细胞发育、分化、增殖、凋亡等生理过程的作用。我们发现 EOC 细胞表达 miR-7，且 miR-7 表达与 EOC 转移能力及 EGFR 表达负相关，因此我们通过组织标本研究、体外细胞培养和体内动物实验来明确 miR-7在 EOC 组织中表达情况；阐明 miR-7 调控 EOC 转移的机制；首先我们通过检测miR-7在卵巢癌组织原发灶、转移灶石蜡切片及组织中的表达情况，同时通过免疫组化检测卵巢癌其EGFR蛋白表达情况，通过Real time PCR及Western blot检测HO-8910、HO-8910pm中miR-7及EGFR表达情况，发现低转移性人浆液性卵巢癌细胞株HO-8910的miR-7表达为高转移性人浆液性卵巢癌细胞株HO-8910pm 的 2.517 ±0.508倍 ，而EGFR蛋白表达则是HO-8910pm更高，而在组织中，miR-7的表达与EGFR的表达同样呈负相关。接着我们通过构建miR-7质粒，瞬时转染miR-7调控细胞株miR-7表达，再通过transwell检测细胞体外迁移及侵袭能力改变情况，发现转染后 HO-8910pm 的 miR-7 表达提高了8. 015 ±0. 1805倍 , ES-2细胞miR-7表达提高了28.13±1.0532倍， 同时抑制 EGFRmRNA 及蛋白表达，通过侵袭和迁移实验证实转染miR-7后细胞的侵袭和迁移能力明显下降。最后通过检测miR-7或EGFRsiRNA转染前后卵巢癌细胞上皮标记β-catenin、间质标记Vimentin表达，以及转染前后EGFR下游信号通路AKT 、ERK蛋白磷酸化水平改变情况，结果发现转染miR-7或EGFRsiRNA后两种细胞的β-catenin蛋白表达均有所升高，而Vimentin蛋白表达则有所抑制而转染后细胞P-AKT，P-ERK1/2表达均有所抑制，且AKT、ERK抑制剂作用于细胞后β-catenin蛋白表达有所升高，而Vimentin蛋白表达则受到抑制，而动物实验同样表明miR-7对EGFR及卵巢癌转移有抑制作用，综上，认为miR-7可通过调控EGFR的表达抑制其下游AKT和ERK信号通路的活化以及逆转EMT，抑制EOC细胞的侵袭转移。