淫羊藿女贞子配伍影响激素干预哮喘大鼠模型糖皮质激素受体作用环节的分子机制研究

Glucocorticoids (GCs) are the mainstay of asthma therapy, but during the process of GC treatment of asthma, the sensitivity of the body to GC is on the decline. How to protect the sensitivity of the anti-inflammatory effects of GC and prevent the occurrence of steroid-resistance is a clinical urgent problem. Based on the common understanding for steroid-resistance of asthma in Chinese and Western medicine and the pre-work, two kinds of GC delivery methods (local administration and systemic administration) are compared in the asthmatic rat model. Focuses on GR functional impairment, four important aspects of the imbalance related to GR functions, including GR/HSP90, GRα/GRβ, GR/GRE and JAK/STAT, are selected in the research. Many advanced molecular biology techniques are applied, such as immunocytochemistry, immunohistochemistry, western blot, in situ hybridization, real-time PCR, Co-Immunoprecipitation, flow cytometry, electrophoretic mobility shift assay, PCR chips. The project aims is to studies the molecular mechanism of steroid-resistance in the GC treatment of asthma and the effective target or pathway of the compatibility of Herba Epimedii and Fructus Ligustri Lucidi from the different levels of overall, cellular and molecular (proteins and genes), respectively. To provide the clinical and experimental basis, and the effective control methods for the treatment of asthma, especially the refractory asthma through the integrative medicine. Meanwhile, it is conducive to the inspiration and reference for the clinical treatment of steroid- resistance in the GC treatment of many autoimmune diseases.

激素反应性降低（即激素抵抗的发生）是哮喘激素治疗中普遍存在的现象，而保护激素抗炎作用的敏感性及防治激素抵抗是临床迫切需要解决的问题。本课题基于中西医对哮喘激素抵抗的共同认识及前期工作基础，以激素局部给药及全身给药2种干预哮喘大鼠模型为研究对象，同时结合细胞水平研究，以GR作用受损为研究核心，选取GR发挥作用的4个重要环节的平衡失调(GR/HSP90、GRα/GRβ、GR/GRE、JAK/STAT)展开研究。采用ICC、免疫组化、western blot、原位杂交、荧光定量PCR、CoIP、流式细胞术、EMSA、PCR芯片等实验方法，分别从蛋白和基因不同角度，从整体、细胞和分子等不同水平，研究哮喘激素抵抗发生的分子机制及中药淫羊藿女贞子提高激素敏感性的作用靶点或途径，以期为临床中西医结合防治哮喘，尤其是难治性哮喘提供临床及实验依据，同时亦为相关免疫性疾病治疗中的激素抵抗提供有益启示和借鉴。

糖皮质激素（GC）反应性降低，甚至GC抵抗的发生是哮喘激素治疗中普遍存在的现象，而保护GC抗炎作用的敏感性及防治GC抵抗是临床迫切需要解决的问题。本研究基于中西医对哮喘GC抵抗的共同认识及前期工作基础，以GC局部给药及全身给药2种干预哮喘大鼠模型为研究对象，同时结合细胞水平研究，以糖皮质激素受体（GR）作用受损为研究核心，选取GR发挥作用的4个重要环节的平衡失调（GR/HSP90、GRα/GRβ、GR/GRE、JAK/STAT）展开研究，分别从蛋白和基因不同角度，从整体、细胞和分子等不同水平，研究哮喘激素抵抗发生的分子机制及中药淫羊藿女贞子提高激素敏感性的作用靶点或途径。.研究结果证实，哮喘大鼠出现气道炎症及气道重塑的病理改变；气道淋巴细胞凋亡率下降、GR 蛋白结合力下降为表现的 GC 作用敏感性降低；GRα、GRβ、HSP90 蛋白或mRNA表达异常，GR/HSP90、GRα/GRβ 比例失调、HSP90与GR的相互作用降低及GRE结合活性减弱为主要表现的 GC 作用途径受损；同时出现大量差异基因的表达，与哮喘相关的多条炎症、免疫等信号传导通路被激活，包括JAK/STAT信号通路。提示哮喘激素抵抗（中医认为属阴阳两虚证）的发生与GR作用途径中诸多环节受损有关。激素全身给药（地塞米松腹腔注射）较激素局部应用（布地奈德雾化）更容易导致激素抵抗的发生，表现在与模型组比较，气道淋巴细胞凋亡、GR含量及GR结合力进一步降低，肺组织GRα蛋白（western blotting法）表达下调，GRβ蛋白（IHC法）表达上调。在激素应用的同时合用淫羊藿女贞子煎剂或提取物，能够不同程度的协同激素改善气道炎症及气道重塑，促进淋巴细胞凋亡，上调GR结合力，对GR作用途径的4个主要环节，包括GR/HSP90、GRα/GRβ、GR/GRE、JAK/STAT信号通路均有较好的改善作用。研究结果提示，平补阴阳中药淫羊藿女贞子与GC合用，能够提高激素抗炎作用的敏感性，预防激素抵抗的发生。本研究结果为临床中西医结合防治哮喘，尤其是难治性激素抵抗型哮喘提供临床及实验依据，同时亦为相关免疫性疾病治疗中的激素抵抗提供有益启示和借鉴。