p12CDK2-AP1与新发现的结合蛋白Nbp相互作用的相关研究。

本项目以所完成国科金项目P12蛋白在口腔癌中缺失的机理研究的结果为基础，以p12CDK2-AP1蛋白及新发现的结合蛋白Nbp为研究对象，利用生物信息学技术明确Nbp的基本结构特征。利用蛋白质表达与纯化技术、免疫动物制备多克隆抗体、免疫组化技术研究Nbp的表达特点。应用免疫共沉淀、GST pull-down技术等技术，研究p12CDK2-AP1与Nbp的相互作用位点。利用双分子荧光互补技术、肿瘤细胞生物学技术研究p12CDK2-AP1与Nbp的相互作用和调控关系，以及结合后结合蛋白的功能。利用生物信息学等技术寻找更多的p12CDK2-AP1的新的作用蛋白。总之，本项目研究的目的在于揭示p12CDK2-AP1与结合蛋白之间相互作用的规律，为研究p12CDK2-AP1在头颈部肿瘤发生发展中的作用如癌变、侵袭、转移的机理奠定基础，为头颈部及颌面部肿瘤的预防、诊断和临床治疗提供研究思路。

1、本项目利用免疫共沉淀技术、GST pull-down技术以及双分子荧光互补技术进一步证明了Nbp (UPP)与p12CDK2AP1蛋白之间的相互作用关系。.（1）P12CDK2-AP1蛋白原核体外表达、纯化及GST pull-down技术证明p12CDK2AP1与Nbp (UPP)蛋白之间的相互作用关系。.（2）在真核细胞内利用免疫共沉淀技术（Co-IP ）证明p12CDK2-AP1和Nbp (UPP)蛋白之间的相互作用关系。.（3）在活细胞内利用双分子荧光互补技术进一步证明p12CDK2AP1和Nbp (UPP)蛋白之间的相互作用关系。.2、本项目进一步研究了Nbp (UPP)蛋白对肿瘤细胞生物学行为的影响。.（1）利用生物信息学方法明确Nbp（UPP）蛋白的基本性质。.（2）通过p12CDK2-AP1沉默与过表达，研究p12CDK2-AP1与UPP基因的表达情况。.（3）UPP基因的甲基化水平检测，证实UPP基因的生物学功能与CDK2-AP1基因相关联。.（4）UPP基因对肿瘤细胞生物学行为的影响。.（5）Nbp（UPP）蛋白外源表达对肿瘤细胞生物学行为的影响。.3、本项目进一步寻找与p12CDK2-AP1蛋白存在相互作用的其他蛋白。.（1）利用计算机相关函数模板的蛋白质-蛋白质相互作用，推测抑癌蛋白CD82和RPL13可能与p12CDK2AP1蛋白之间存在相互作用。.（2） 利用IP方法证明抑癌蛋白CD82和RPL13与p12CDK2AP1蛋白之间相互作用的存在。.（3）利用串联质谱技术筛选与p12CDK2AP1蛋白相结合的其他蛋白。.本项目的研究有助于揭示p12CDK2AP1抑癌因子在细胞癌变过程中的作用及其作用水平和发生机制，为探究引起细胞癌变的生物大分子网络的构成奠定了蛋白分子基础，为进一步阐明p12CDK2AP1抑癌因子在口腔鳞癌发生发展中的分子生物学机理奠定实验基础，这对口腔癌的预防、诊断、治疗及监控都具有重要的意义。.本课题组已发表SCI 6篇，待发表SCI 2篇，中文核心期刊1篇，待发中文期刊1篇，会议论文5篇。