血小板源性MMP-12、 MMP-7和CEACAM1在血小板聚集中的作用及机理研究

本申请将从基质金属蛋白酶12、7（MMP-12，MMP-7）和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)在人体血小板的表达、转运情况探讨MMP-12、7和CEACAM1在血小板聚集中的作用及机理；从MMP-12与CEACAM1相互作用的基础上研究蛋白质结构与功能的关系及其在血栓性疾病中的作用机制；从中草药中筛选对MMP-12、7有抑制作用的先导化合物三方面出发，研究MMPs在血小板聚集中的作用。MMPs在动脉粥样硬化斑块破裂和由此引发的血小板激活中有重要作用，抗基质依赖的血小板激活物的研发受到关注。因此，我们将在发现血小板合成分泌MMP-12、7的基础上，进一步揭示由血小板聚集剂诱导的MMP-12、7和CEACAM1介导的信号途径对血小板聚集的作用机制，着重研究MMP-12和CEACAM1相互作用对血小板聚集的影响，探讨MMP-12作为抑制血小板聚集潜在治疗靶点的可能性。

血小板膜蛋白受体在血小板激活过程中发挥至关重要的作用，人体CEACAM1，与血小板膜受体GPVI、 PECAM-1相同，同属Ig超家族成员，负调节血小板与胶原的相互作用及血栓的形成，但相关机制仍不清。目前发现在血小板中表达的MMPs有MMP-1、2、3、9 、14，它们通过剪切血小板膜蛋白受体的胞外片段，在血小板的黏附及聚集中发挥重要作用。我们在基因、蛋白及细胞水平证实了人体血小板具有合成分泌.MMP12及MMP-7的功能，通过流式细胞仪发现MMP12可介导人体血小板膜 CEACAM1脱落，采用高效液相色谱、质谱及N端测序分析，我们已精确定位CEACAM1序列中MMP12的酶切位点，并获得分子量与序列及理论与实测分子量均相符合的短肽9条，采用全血电阻法检测发现， MMP12、短肽6783及8496可促进胶原刺激的血小板聚集；采用CEACAM1氨基酸序列中含MMP12酶切位点的荧光短肽，发明了一种检测人体组织MMP12活性的荧光多肽底物及检测方法，该方法操作简便，快速，有一定的特异性；通过选择蛋白质晶体复合物的测试集建立了针对MMP12蛋白的虚拟筛选方法，发现短肽Gly6Thr对MMP12具有抑制作用，呈剂量依赖型。采用血清通过ELISA检测发现冠心病患者CEACAM1及MMP12血清水平明显升高。通过对MMP12-CEACAM1途径的发生方式、机制及生物学功能的深入研究，可为血栓性疾病的诊治提供新的理论基础及研究方向。