miRNA-34a-5p靶向AKT1通过PI3K/Akt通路调节子宫内膜异位症子宫内膜细胞自噬及侵袭性的研究

Endometriosis (EM) is a benign gynecological disease with malignant tumor characteristics, its harm is serious, of unknown etiology, limited efficacy therapy and high recurrence rate, a new breakthrough is still need to explore the new efficient therapy for EM.Increased invasion of endometrial cells is one of the important causes of EM. Many recent studies have found that EM endometrial cells shows decreased level of autophagy, our previous study showed that miRNA-34a-5p in the endometrium showed low expression in EM, miRNA-34a-5p candidate target gene AKT1 predicted is a negative autophagic regulatory gene,and can activate the classical negative autophagic regulatory singnaling pathway-PI3K/Akt,so we speculate that the miRNA-34a-5p with low level expression upregulated the expression of AKT1 which activates the PI3K/Akt singnaling pathway, inhibit the autophagy in endometrial cells which lead to more cell invasion and promote the pathogenesis of EM. This project will focus on the following two questions to confirm our hypothesis: ①The regulation on AKT1 gene of miRNA-34a-5p;②The regulation on cell invasion of low autophagy on endometrial cells in EM.To clarify the above problems will be helpful to reveal the new mechanism of EM and lay a foundation for exploring more effective and safe therapy.

子宫内膜异位症（EM）是具有恶性肿瘤特性的妇科良性病，其危害严重，病因不明，疗效有限，复发率极高，故仍需探寻EM病因的新突破，探索更高效的疗法。子宫内膜细胞侵袭性增强是EM发病的重要原因之一。许多新近研究发现EM子宫内膜细胞自噬水平降低，我们前期研究发现，miRNA-34a-5p在EM子宫内膜中显著低表达，预测出的miRNA-34a-5p候选靶基因AKT1是自噬负调控基因，并可激活经典的自噬负调控通路PI3K/Akt，因此我们推测，低水平的miRNA-34a-5p上调AKT1表达，激活PI3K/Akt通路，抑制子宫内膜细胞自噬，导致子宫内膜细胞侵袭性增强，促进EM的发病。本项目拟重点研究以下两个问题以证实我们的推测：①miRNA-34a-5p对AKT1基因的调控作用；②EM子宫内膜细胞自噬降低对细胞侵袭性的影响。阐明上述问题，有助于揭示EM病因的新机制，为探索更高效安全的治疗方法奠定基础。

子宫内膜异位症（EM）是具有恶性肿瘤特性的妇科良性病，发病率逐年上升，主要表现为腹痛和不孕，严重危害妇女健康，因EM病因不明，缺乏针对病因的治疗手段，目前各种疗法复发率可高达60%，故仍需探寻EM病因的新突破，探索更高效的疗法。子宫内膜细胞侵袭性增强是EM发病的重要原因之一，miRNA的异常表达是影响细胞侵袭性的重要因素。我们利用基因芯片测序发现miR-205-5p在EM患者子宫内膜组织、血清及子宫内膜细胞中均特异性低表达；结合靶基因预测软件及文献检索结果，筛选并验证了ANGPT2是miR-205-5p的目标靶基因。体外成功分离培养了EM及非EM人子宫内膜间质细胞和腺上皮细胞，并分别进行角蛋白和波形蛋白的细胞免疫荧光染色鉴定，因腺上皮细胞无法传代，故选用间质细胞进行功能实验。体外实验证实低表达的miR-205-5p可增强子宫内膜间质细胞的增殖、侵袭和迁移能力，减少细胞自噬，这些研究结果通过功能挽回实验得到进一步证实。在动物实验中，增加子宫内膜间质细胞miR-205-5p的表达，会使其在裸鼠皮下的成瘤能力降低。在子宫内膜间质细胞中，调节miR-205-5p的表达，可用PCR法检测到ANGPT2表达水平相应的变化，证实了miR-205-5p对ANGPT2表达的调控作用。采用免疫组化法及原位杂交法，在EM及非EM人子宫内膜组织中，也证实了miR-205-5p与ANGPT2表达的负性相关性。Western Blot提示miR-205-5p和ANGPT2基因的表达与AKT/ERK通路具有一定的相关性。这些研究结果证实了miR-205-5p可靶向ANGPT2基因，通过增加子宫内膜细胞的侵袭性，诱发EM，这一结果为探索EM病因和治疗靶点找到了新的突破口，为探索更高效安全的治疗方法奠定了理论基础。相关成果发表SCI论文3篇，中文核心期刊论文7篇，培养硕士研究生1人，会议发言1次。