乙肝病毒X蛋白通过诱导足细胞凋亡参与乙型肝炎病毒相关性肾炎尿蛋白的形成

The renal damage pathological type of Hepatitis b virus-associated glomerulonephritis（HBV-GN） was membranous nephropathy(MN). There was varying degrees sertoli cell loss, proliferation ability, apoptosis and desquamation in renal tissue of these children. Hepatitis b virus X protein (HBx protein) was a basic viral proteins of virus infection cycle in the body, mainly located in cytoplasm, a few part located in the nucleus, HBx protein in the nucleus that can directly act on the transcription factor, have trans activation，so have a variety of cellular functions, which can activate a variety of cell signal transduction pathways, regulate cell apoptosis. Which has become a research hotspot in the molecules of hepatitis b related diseases.This research focused on whether the HBx protein by induced podocyte apoptosis involved in the formation of urine proteinin of HBV-GN. We will through animal model, cell culture and clinical experiment to observe the the effect of HBx protein on podocyte function, and the HBx gene mutation impacts on DNA and cccDNA loads, proteinuria quantitation and renal pathology, to explore its important role in the HBV-GN pathogenesis, and provide new molecular targets for the treatment of HBV-GN.

乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）的肾损害病理类型多为膜性肾病。该类患儿的肾组织中均存在不同程度的足细胞缺失，增殖能力下降、凋亡和脱落。乙型肝炎病毒X蛋白（HBx蛋白）是体内乙肝病毒感染周期中基本的病毒蛋白, 主要定位于宿主细胞质，小部分位于细胞核内，胞核内的HBx蛋白可直接作用于转录因子，具有反式激活作用，因而具备多种细胞功能，能够激活多种细胞的信号转导通路，调节细胞凋亡。HBx蛋白目前已成为研究乙肝相关性疾病的热点分子。本研究以HBx蛋白是否通过诱导足细胞凋亡参与HBV-GN尿蛋白形成为主线，通过动物模型、体外细胞培养和临床实验3个层面的研究工作，分别观察HBx蛋白对足细胞功能的影响，进一步对HBx基因进行核苷酸序列分析，探讨HBx基因多态性与与HBV DNA定量、cccDNA、尿蛋白定量及肾脏病理分级的关系，探讨其在HBV-GN发病机制中的重要作用，为治疗HBV-GN提供新靶点。

背景 HBx蛋白是否通过诱导足细胞凋亡参与HBV-GN尿蛋白形成为主线，探讨其在HBV-GN的发病机制中的作用。内容 利用基因转染技术，从细胞学角度初步探讨HBx 对小鼠足细胞系（MPC5）增殖和凋亡的影响及可能的分子机制；利用INF-α 与HBx 诱导MPC5 共培养，检测MPC5 的凋亡情况，同时检测足细胞 SD相关蛋白（CD2AP、nephrin、synaptopodin）和细胞骨架相关蛋白（TRPC6）的表达水平，为干扰素治疗 HBV-GN 提供体外细胞实验依据。结果 HBx 转染MPC5 细胞 48h后HBx表达最高，HBx 转染组中nephrin蛋白表达水平显著低于空白对照及阴性对照， 转染HBx 基因后足细胞增殖明显受抑，同时凋亡率显著增高， 此外，HBx转染组STAT3、JAK2、p- STAT3 和 p- JAK2蛋白表达均显著增高，caspase-3 在HBx 转染组中的表达也显著增高；INF-α与各组足细胞共培养后，与Contral组相比，INF-α组，足细胞凋亡无差异，足细胞 nephrin、 synaptopodin、CD2AP和TRPC6的mRNA和蛋白表达水平的无差异，与Contral组相比，HBx组，足细胞凋亡明显增加， nephrin、synaptopodin、CD2 AP mRNA和蛋白的表达水平明显降低，TRPC6mRNA和蛋白的表达水平明显增高，与HBx组相比，HBx+INF-α组，结果相反。结论 HBx 可下调足细胞中nephrin 蛋白表达，抑制足细胞增殖，并促进其凋亡的发生，其作用机制可能与STAT3/ JAK2信号通路活化有关； INF-α 可改善HBx诱导的足细胞的凋亡，促进足细胞足突之间的裂孔隔膜相关蛋白和细胞骨架相关蛋白的表达。意义 为HBV-GN发病机制的研究提供了新的方向，为靶向治疗提供新的手段。