基于TLR4-NF-KB通路对“益气凉血生肌”方中生肌内涵的机制研究

Percutaneous coronary intervention has become one of the most common and mature treatments for coronary heart disease. However, major adverse cardiovascular events (MACE) occur after PCI, poor repair of endothelial cell is the main reason for the occurrence of MACE,and the inflammatory response is a key mechanism for MACE after PCI . NF-κB as a signaling pathway in the hub, be involved in a variety of inflammatory factors and cytokine gene expression regulation. Yiqi Liangxue Shengji method may delay the NF-κβ signaling pathway, inhibit the release of inflammatory factors and cytokines, inhibit the inflammatory response, innhibit vascular smooth muscle cell proliferation, promote VEC repair, thus play the role of "Shengji" , after PCI damage repair. In this study, we used to reconstruct the animal model of atherosclerotic vascular stenosis balloon injury and the cell model of LPS induced endothelial cell injury, through the TLR4-NF-κB pathway, from the whole - cell - molecular signaling pathway in three ways,by using TT, CKK-8, ELISA and Western blot and RT-PCR,to investigate the effect of Yiqi Liangxue Shengji Decoction on the repair of vascular endothelial injury after PCI . This study will provide a new way and method for the prevention and treatment of endothelial cell repair and MACE prevention after PCI.

经皮冠状动脉介入术（PCI）已成为治疗冠心病的一种最常用的治疗手段，但PCI术后仍会发生不良心血管事件（MACE），内皮修复不良是发生MACE的主要原因,而炎症反应是PCI术后发生MACE的关键机制。NF-κB作为信号传导途径中的枢纽，参与多种炎症因子和细胞因子的表达调控。益气凉血生肌方干预PCI术后血管内皮损伤修复可能是通过延迟NF-κβ信号通路，抑制炎症因子及细胞因子释放，抑制炎症反应，抑制VSMC增殖，促进VEC修复，从而起到“生肌”的作用。本研究拟复制动脉粥样硬化血管狭窄球囊损伤动物模型，LPS诱导内皮细胞损伤细胞模型，通过TLR4-NF-κB通路的信号转导，采用ELISA、Western blot及RT-PCR等技术，从整体-细胞-分子信号通路三方面，研究益气凉血生肌方对PCI术后血管内皮损伤修复的影响。本研究将为益气凉血生肌方防治PCI术后内皮细胞修复及MACE防治提供新的思路

经皮冠状动脉介入术（percutaneous coronary intervention，PCI）已成为治疗冠心病的一种最常用、最成熟的治疗手段，PCI对血管病变局部的强力机械扩张必然导致血管内膜撕裂和损伤，随后将引发靶血管一系列复杂的生物学修复过程，血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）损伤修复不良和血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）增生过度都将使得支架内再狭窄或者血栓形成，导致主要不良心血管事件（major adverse cardiac event，MACE）的发生。药物涂层支架（Drug eluting stents DES）主要通过抑制内膜增生降低支架内再狭窄的发生,但仍有晚期支架内血栓的风险，与其抑制VSMC的过度增生的同时也抑制了VEC的增生有关，课题组前期临床研究表明中医药（益气凉血生肌方）可降低PCI术后MACE的发生及改善远期预后，实验研究提示该方对损伤性VEC具有促进增殖的作用，中医药研究或可成为解决这一问题的途径之一。. 本项目通过肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人脐动脉内皮细胞炎症损伤模型和构建兔颈总动脉球囊损伤内皮剥脱模型，基于NF-κB通路，从动物-细胞-分子生物学层面，从炎症角度探讨了益气凉血生肌方改善损伤血管内皮功能的作用与机制。研究表明：①益气凉血生肌方可抑制 TNF-α诱导的血管内皮细胞的炎症反应，对血管内皮细胞具有促进修复的作用，其机制可能与抑制 NF-κB 通路相关。②益气凉血生肌方对球囊损伤术后兔颈动脉具有促进修复的作用，促进VEC增殖修复，抑制VSMC增殖迁移，改善损伤血管内皮功能。③益气凉血生肌方可减轻兔颈动脉球囊损伤术后炎症反应，其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关。④本实验从整体-细胞-分子信号通路三方面，验证了“益气凉血生肌方中“生肌”的内涵机制可能是通过延迟 NF-κβ信号通路，抑制炎症因子及细胞因子的释放，抑制炎症反应，从而促进VEC修复，抑制 VSMC 的过度增生，干预 PCI 术后血管损伤修复机制”假说的科学性，解决了血管内皮损伤修复与益气凉血生肌方“生肌”作用的相关性的关键问题。