通读疗法对无义突变所致重型血友病治疗的初步研究

血友病是凝血因子Ⅷ/Ⅸ基因突变引起的性连锁隐性遗传性出血性疾病，致残率及死亡率高。目前尚无根治方法，需终生输注凝血因子，探索新的治疗药物具有显著的社会和经济效益。无义突变是导致重型血友病的重要机制之一，其与产生提前终止的无义密码子(PTC)、启动无义突变介导的mRNA降解（NMD）有关。小分子促通读化合物- - PTC124和氨基糖苷类药物可促进基因阅读框内无义密码子的通读，增加蛋白质合成，但作用靶点及机制尚不明确。本课题将筛选重型血友病患者FⅧ、FⅨ基因中无义突变频发位点；利用定点突变技术构建无义突变真核表达载体，转染至COS-7细胞；培养携带无义突变的患者家系成员骨髓间充质干细胞，诱导分化为肝样细胞；分别检测PTC124和庆大霉素干预前后各组细胞FⅧ/FⅨ mRNA、蛋白表达量及活性变化，研究药物是否通过对无义突变的促通读作用而增加凝血因子的合成，为重型血友病药物治疗及机制的研究奠定基础。