噬菌体展示肽库筛选农药通用结构半抗原的肽模拟物及其在农药多残留免疫检测中的应用研究

目前免疫检测作为快速可靠的检测技术在农药单残留的检测上应用较多，而在农药多残留检测的运用上受到限制，困扰这一问题的关键是方法的检测谱窄、灵敏度不足。本项目引入分子设计理念，利用噬菌体展示肽库筛选技术，提出解决农药多残留免疫分析方法检测谱窄和灵敏度不足问题的新思路。研究采用量子化学和结构化学的理论和方法，从分子角度设计能最大程度突出和保留磷酸酯类和硫代磷酸酯类有机磷农药的两种不同的通用结构半抗原; 将它们偶联到相同的蛋白质上，优化并制备双簇农药通用结构人工抗原，在此基础上制备和筛选出"宽谱特异性识别"的高亲和力多抗；以纯化的多抗为配基，利用噬菌体展示肽库，筛选有机磷农药通用结构半抗原的肽模拟物，建立异源ELISA, 提高"灵敏度";比较异源ELISA与对照ELISA灵敏度差异。为进一步建立检测谱宽、灵敏度高的农药多残留异源ELISA快速检测方法提供科学依据。

目前免疫检测作为快速可靠的检测技术在农药单残留的检测上应用较多，而在农药多残留检测的运用上受到限制，困扰这一问题的关键是方法的检测谱窄、灵敏度不足。本项目引入分子设计理念，利用噬菌体展示肽库筛选技术，提出解决农药多残留免疫分析方法检测谱窄和灵敏度不足问题的新思路。首先，从分子设计的角度，设计合成和选取了代表芳香基二甲氧基硫代磷酸酯类有机磷农药、芳香基二乙氧基磷酸酯类有机磷农药、直链二甲氧基硫代磷酸酯类有机磷农药和直链二乙基磷酸酯类有机磷农药的4种通用结构半抗原PM、PO、PS和DPA，然后将它们两两偶联到相同的蛋白质上，优化并制备了4种双簇农药通用结构人工抗原，在此基础上制备和筛选出4种高亲和力多抗，间接竞争ELISA检测表明，制备的四种多克隆抗体都具有良好的宽谱特异性，特别是以双簇农药通用结构人工抗原PO-PS-BSA为免疫原制备的多抗PO-PS,能够识别常用的11种有机磷农药，并且检测限达到了纳克级。以纯化好的PO-PS多抗为配基，利用噬菌体展示肽库，筛选出了有机磷农药通用结构半抗原的肽模拟物30多种，并建立了竞争肽模拟物异源ELISA,结果显示，噬菌体的模拟肽物能够有效的与选定的常用的有机磷农药农药进行竞争，并且检测灵敏度都有明显的提高；因此筛选出来的噬菌体模拟肽物可作为有机磷农药的结构类似物，用于有机磷农药的多残留检测方法的建立。本研究结果为建立检测谱宽、灵敏度高的农药多残留异源ELISA 快速检测方法提供科学依据。