抗雌激素治疗在晚期非小细胞肺癌EGFR-TKIs原继发耐药中的机理研究

Primary and acquired drug resistance remains major clinical problem of molecular targeted therapy (EGFR-TKIs)in non-small cell lung cancer patients. Mechanism of resistance and reversion of resistance to TKIs is still elusive.Estrogen-type lung cancer may become the target population of anti-estrogen therapy. Several ongoing clinical trials are evaluating effect and safety of anti-estrogen therapy combined molecular targeted therapy.Cell experiments confirmed that EGFR and ER pathways show "shift" dynamics and TKIs and anti-estrogen drugs can inhibit cell proliferation and promote apoptosis to different extent.Combination of two drug regimes is more effective than single drug.This study will focus on the role of ER in the acquired resistance of TKIs. The project intends to establish lung adenocarcinoma cell line with acquired resistant to gefitinib and analyze alternation of related proteins in EGFR and ER pathway. While taking advantage of plasmid transfection and RNA interference techniques to further validate these results in cell and animal models. To obtain other biomarkers related with primary and aquired resistance in addition to EGFR, KRAS, T790M, CMET et al. Our results will be validated on clinical specimens in prospectively study.

非小细胞肺癌分子靶向治疗（EGFR-TKIs）在临床面临的主要问题是原发及继发耐药。有关TKIs治疗耐药机制及逆转的研究已经成为临床亟待解决的主要问题之一。雌激素分泌型肺癌有可能成为抗雌激素治疗的目标人群，目前抗雌激素联合分子靶向治疗正在开展临床试验且已有安全性报道。细胞实验证实EGFR和ER通路呈现"此消彼长"的动态变化且TKIs和抗雌激素药物均能不同程度抑制细胞增殖和促进凋亡，两药联合效应强于单药。本研究将重点关注ER在TKIs继发耐药中的作用。本项目拟建立吉非替尼继发耐药肺腺癌细胞系，分析EGFR通路和ER通路相关蛋白的改变特点及规律。同时利用质粒转染和RNA干扰等综合技术手段，在细胞和动物模型中进一步验证上述结果。获得除EGFR、KRAS、T790M、CMET之外与EGFT-TKIs原继发耐药相关的分子标志物，最后将实验结果在临床标本中进行前瞻试验性研究。

目的：.雌激素受体通路（ER）与表皮生长因子受体（EGFR）信号通路具有相互作用，本研究聚焦细胞内的的ERβ定位（细胞质或核）对EGFR-TKI疗效的影响。方法.采用免疫组织化学法（IHC） 检测149例接受过 EGFR-TKI治疗的IV期非小细胞肺癌患者的肿瘤组织标本中ER表达（ERα或β），并分析其与临床病理和预后的关系，并在细胞系中进一步研究ERβ表达的意义。.结果.ERα和ERβ的表达分别为15 ％和28.9 ％，ERβ阳性患者无进展生存期（PFS）短于ERβ阴性者（3.1个月vs7.3个月，P =0.061）。亚组分析显示，EGFR突变型患者中，这种趋势更加明显具有显着统计意义（4.7个月vs 10.9个月，P = 0.042 ）。Cox比例风险模型显示，女性、EGFR突变和ERβ阴性表达是PFS的独立预测因素。细胞学实验结果显示，PC-9细胞系胞浆及胞核均表达ERβ，雌二醇（E2）能诱导PC-9细胞对厄洛替尼抗性增加3倍，而这种抗药性能被ER阻断剂（氟维司群）或siRNA所逆转。E2通过非基因激活（ MAPK磷酸化）方式引起包浆ERβ活化。厄洛替尼联合氟维司群比单一药物对PC-9细胞更为有效。临床上有2例患者EGFR突变阳性，EGFR-TKI治疗进展后，再次接受氟维司群联合EGFR-TKI治疗重新获得病情控制。.结论.对于EGFR突变型患者，细胞浆ERβ表达可能是EGFR-TKI预后不良的标记物。