脓毒症时中枢和外周组织高迁移率族蛋白B1对细胞免疫反应的负向调控效应与机制研究

目前诸多研究主要关注晚期细胞因子- - 高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的炎症效应方面，我们新近的资料提示HMGB1与脓毒症时细胞免疫功能紊乱密切相关，但其负向调控途径迄今缺乏了解。本项目以脓毒症状态下机体免疫反应负向调控机制为切入点，采用野生型和烟碱型乙酰胆碱受体α7基因缺陷动物模型，重点探讨中枢性HMGB1对外周细胞免疫反应(包括T淋巴细胞、树突状细胞和调节性T细胞等)的影响及其与胆碱能抗炎通路的内在联系；同时，深入研究外周组织HMGB1通过调节性T细胞中内质网应激反应和负调控蛋白(TIPE2)等途径直接诱导机体免疫功能障碍的分子机制与关键环节。本项目通过中枢和外周HMGB1免疫调控效应的系统性研究，将丰富和发展我们提出的"HMGB1是损伤后细胞免疫反应障碍的重要调控分子"假说，从而对脓毒症状态下免疫功能紊乱的发生与发展过程形成更完整的认识，为开展针对性防治策略提供新思路、开辟新途径。

脓毒症状态下高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与机体细胞免疫功能紊乱密切相关，但其具体负向调控途径尚不清楚。该项目重点探讨脓毒症时中枢性HMGB1对外周细胞免疫反应[包括T细胞、树突状细胞(DC)和调节性T细胞(Treg)等]的影响及其与胆碱能抗炎通路的内在联系；并研究外周组织HMGB1通过Treg中内质网应激反应(ERS)和负调控蛋白(TIPE2)等途径直接诱导机体免疫功能障碍的分子机制与关键环节。取得的主要研究结果如下：(1)侧脑室注射HMGB1后脾组织T细胞、DC免疫功能显著受抑。与野生型(WT)小鼠相比，侧脑室注射HMGB1后α7 nAchR敲除小鼠T细胞增殖活性增加。HMGB1通过上调PC12细胞α7 nAChR表达、激活ERK通路进而对胆碱能活性发挥调控作用。(2)烧伤感染后CD4+ T细胞TIPE2表达显著增强，沉默TIPE2后CD4+ T细胞增殖能力增强；siRNA-TIPE2转染Treg组T细胞功能改善、Th1/Th2比例升高。并发现α7 nAchR是介导Treg抑制效应的受体之一。(3)HMGB1刺激可诱导DC/Treg中ERS的发生，干扰XBP-1基因表达可抑制DC成熟分化，并下调Treg免疫抑制效应；而缓解ERS有利于减轻免疫障碍状态，从而改善脓毒症动物预后。(4)中枢拮抗HMGB1(BoxA)动物肺、肝、肾等多器官损害显著减轻，并有效缓解Treg介导的免疫抑制效应；中枢给予α7 nAChR激动剂明显提高脓毒症大鼠7天生存率。(5)严重烧伤患者HMGB1含量与T细胞增殖活性、IL-2水平呈显著负相关，与Treg免疫抑制分子表达呈正相关；Treg通过分泌抑制性细胞因子参与机体免疫失衡、诱发脓毒症的病理过程。上述研究进一步论证了我们提出“HMGB1是损伤后细胞免疫反应障碍的重要调控分子”新观点，为开展针对性脓毒症免疫调理策略提供新思路、开辟新途径。