syndecan-1在糖尿病视网膜病变中的作用及其机制研究

高血糖引起视网膜微血管内皮细胞表面黏附分子的改变，导致细胞间及细胞与基质间黏附的异常，破坏了血-视网膜屏障，引起糖尿病视网膜病变。syndecan-1是作用广泛的黏附分子。但目前国内外尚未有syndecan-1在糖尿病视网膜病变中作用的研究。我们前期发现，syndecan-1参与人视网膜的病理生理过程及2型糖尿病的发生发展。据此，我们提出假说：syndecan-1在糖尿病视网膜病变中起一定的作用，但其作用机制有待进一步探讨。已知syndecan-1可通过调控HGF而发挥作用，且syndecan-1与PKC发生分子连接，而PKC及HGF在糖尿病视网膜病变中起重要作用。本研究拟通过人体临床标本、细胞学和动物实验的检测，采用基因转染、基因沉默、染色质免疫共沉淀等技术，明确syndecan-1在糖尿病视网膜病变中的作用及其机制，评估其临床检测价值，从而进一步了解该病的发病机理，为其防治奠定理论基础

我们已完成全部临床实验、大部分动物实验和部分细胞实验。临床实验：（1）2型糖尿病患者血清中syndecan-1较健康者明显升高，其中糖尿病肾病组患者血清syndecan-1升高尤显著，且血肌酐的水平与血清syndecan-1明显相关。（2）与健康者相比，2型糖尿病组及非糖尿病肾病的肾病组患者尿液syndecan-1均明显降低。（3）在增生性糖尿病视网膜病变（PDR）并发牵拉性视网膜脱离患者的玻璃体液中，syndecan-1和HGF都显著升高，而上皮中性粒细胞活化肽78水平明显降低，但三者之间无相关性。（4）与正常视网膜组织相比，PDR患者的视网膜增殖膜中syndecan-1的表达明显减低，而HGF和PKC的表达增强。（5）我们观察了玻璃体腔内注射贝伐单抗对DR作用的机制，发现贝伐单抗可明显降低视网膜增殖膜中血管内皮细胞的数量、VEGF和HIF-1α的表达。动物实验：（1）SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素后，可成功诱导糖尿病，大鼠出现了典型的“三多一少”症状，12周时，部分大鼠出现了白内障。（2）实验发现，糖尿病大鼠9周龄时，视网膜周边血管走形迂曲，毛细血管网明显减少，部分毛细血管灌注不良。与正常对照组相比，糖尿病大鼠视网膜组织水肿、增厚。（3）与对照组相比，syndecan-1在糖尿病大鼠视网膜组织的表达减低，并与糖尿病的病程相关。（4）与对照组相比，PKC和HGF在糖尿病大鼠视网膜组织的表达均增强，但HGF的表达在7周龄达峰值后逐渐减低。（5）在糖尿病大鼠肝组织中，syndecan-1表达增强，并随着糖尿病病程的增加而逐渐上调；HGF的表达为先升后降，PKC的表达则逐渐增强。细胞实验：（1）因体外培养的大鼠视网膜微血管内皮细胞传代困难，我们培养ARPE-19细胞系并进行了部分实验。高糖组RPE细胞生长曲线较正常浓度葡萄组细胞生长曲线为低，但组间无明显差异。高糖刺激后，RPE细胞syndecan-1的表达减低，刺激12h时RPE细胞几乎不表达syndecan-1，但随后表达开始恢复。采用syndecan-1 siRNA转染RPE细胞，发现细胞的贴附力和延展性明显下降，细胞间的间隙加大。（2）我们已培养恒河猴视网膜血管内皮细胞，正进行后续的实验。已发表文章8篇（SCI 1篇），主编专著2部，获得军队级滚动课题1项，培养多名人才，并推动了科室在DR方面的临床和科研发展。