SPARC在颅内动脉瘤发病中对动脉稳态的作用及机制研究

遗传因素在IA病理发生中的作用日益受到人们的重视。研究发现，动脉瘤中存在着富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白（SPARC）过度表达的现象，提示SPARC在动脉瘤病理发生中起重要的作用。本课题提出在动脉瘤形成过程中，血流动力学因素不断造成动脉分叉处动脉壁内皮细胞等的微小损伤，而又由于遗传性因素导致的SPARC过表达，通过调节动脉壁的细胞外基质各种因子，影响动脉稳态的平衡，导致血管壁退行性变，动脉瘤形成。本课题通过研究SPARC在患者动脉瘤术后标本及兔动脉瘤模型中的表达，应用外源性SPARC刺激体外培养的血管平滑肌细胞及RNA干扰技术抑制SPARC基因的表达，综合应用RT-PCR、Western blot、Elisa、流式细胞仪、透射电镜等多种研究方法，通过正反两方面探讨其与各种细胞外因子的相互作用，确定其在动脉瘤发病机制中的作用，期望其成为评估动脉瘤形成和破裂的有意义的生物学标志物及潜在的治疗靶点

一 研究背景：. 颅内动脉瘤（IA）是自发性蛛网膜下腔出血的首要原因。 SPARC在组织重构、细胞增殖等病理生理过程中有重要作用。基质金属酶（MMPs）是参与细胞外基质降解最重要的蛋白酶，它能降解已知的所有基质成分，是颅内动脉瘤发生发展的关键一步。而MMP-2/-9是最为重要的基质金属蛋白酶,与动脉瘤关系密切。探讨SPARC、MMP-2/-9蛋白的表达与动脉瘤发生的相关性对研究动脉瘤形成机制有重要的临床意义。.二 研究内容：. 颅内动脉瘤为SPARC，MMP-2和MMP-9行HE和免疫组织化学染色。作为对照，willis动脉管壁同样行免疫组化染色。所有标本包埋在石蜡中。为评价SPARC，MMP-2和MMP-9的表达水平，还用western-blot分析三个可用的新鲜颅内动脉瘤的标本。同时，我们正在通过体外细胞和动物模型来探讨SPARC在动脉瘤发病中的作用机制。.三 研究结果：. 1 HE染色结果显示，光镜下，动脉瘤（全层）几乎看不到平滑肌，弹力纤维缺如，代之以胶原纤维；有时见壁层组织坏死和炎细胞浸润，腔内可见血栓；动脉瘤有时有少量出血；常有附壁血栓，内膜纤维性增厚（胶原纤维）；中膜萎缩，弹力纤维断裂/纤维化/钙化，外膜纤维性增生；慢性炎症反应。. 2 免疫组织化学染色表明，正常颅内willis动脉管壁的SPARC，mmp-2和mmp-9表现为低阳性或不染色；但人颅内动脉瘤组织的SPARC，mmp-2和mmp-9均表现为强染色。同时观察到，不论未破裂动脉瘤还是破裂动脉瘤SPARC，mmp-2和mmp-9均表现为中至高强度的染色。统计分析表明，SPARC染色和mmp-2和mmp-9的染色的等级相关有统计学意义（p<0.001）。. 3 Western-blot分析显示动脉瘤组织与正常willis动脉环的动脉相比，颅内动脉瘤组织中的SPARC、mmp-2和mmp-9显著上调。.四 研究意义：. 通过本课题的研究，明确SPARC、MMP-2/-9蛋白的表达与颅内动脉瘤发生密切相关，且SPARC蛋白可能通过调控细胞外基质蛋白的表达影响动脉瘤的形成与进展；细胞外基质的破裂很可能是动脉瘤形成的病理生理过程，提供一个新的与颅内动脉瘤密切相关的潜在靶点。