鲍曼不动杆菌膜蛋白OmpA下调促进白色念珠菌感染的机制研究

抗感染治疗中鲍曼不动杆菌易多重耐药，促进白色念珠菌的感染，导致细菌真菌混合感染，造成治疗困难和病死率增加。鲍曼不动杆菌膜蛋白OmpA在其致病中有重要意义，它参与形成的生物膜能抑制白色念珠菌生长，而在多重耐药菌株中表达下调。本项目通过同源重组和构建鲍曼不动杆菌-大肠杆菌穿梭质粒分别在鲍曼不动杆菌中敲除和高表达膜蛋白OmpA，并作用于白色念珠菌，经激光共聚焦显微镜和离子交换树脂连续层析测定对菌丝的抑制作用。同时，纯化膜蛋白OmpA 并作用于白色念珠菌，分别加入RNA和蛋白合成抑制剂，经Real-Time PCR、Nothern Blot和Western Blot检测菌丝生长基因Cyr1P－Cap1－G-actin的转录和表达，明确OmpA抑制菌丝形成的作用环节。通过对多重耐药鲍曼不动杆菌膜蛋白OmpA下调而促进白色念珠菌感染的作用研究，阐明细菌真菌混合感染的形成机制并为临床治疗提供新思路。

通过本研究，我们验证了鲍曼不动杆菌能有效抑制白色念珠菌菌丝生长，而对孢子没有作用，且小鼠动物试验表明细菌感染然后继发侵袭性真菌菌丝感染具有更大的炎症损伤。另外，通过构建OmpA膜蛋白敲除及其过表达的鲍曼不动杆菌与真菌的相互作用表明它参与了抑制部分菌丝的形成。在此基础上，我们又选取了临床泛耐药鲍曼不动杆菌和敏感组筛选出表达差异的蛋白12个，并做了部分基因敲除和构建表达载体工作，将基于这课题的基础上筛选临床治疗更为棘手的耐药菌株合并真菌感染的问题，寻找临床有可能为防控侵袭性真菌感染更为有效的参考。