基于TGF-β/Smad通路研究"风药"对活血化瘀增效的作用机制

主要用于辛散解表祛邪的"风药"，与健脾益气、益精明目、活血化瘀等方药配伍，具有增效功能，其论述散见于历代医家的著作与经典方剂配伍中。课题组前期动物实验和临床验证发现，"风药"对活血化瘀方药增效显著，但其分子机制的研究尚属空白。前期血瘀证研究还发现，血瘀证形成与活血化瘀疗效作用环节，均与TGF-β/Smad信号通路相关。.本项目以肝纤维化（血瘀证）大鼠模型为研究对象，以TGF-β/Smad通路为切入点，采用TGF-β/Smad信号通路芯片检测相关基因的表达，以及QT-PCR方法加以验证，通过"风药"、活血化瘀药、"风药"加活血化瘀药三组药物的治疗干预，比较各组在病理、生化、TGF-β/Smad信号通路基因表达等方面的异同，探索"风药"对活血化瘀方药增效的机理，拓宽血瘀证治疗的途径，为中医治则治法及方剂配伍理论提供新的思路，提高中医临床疗效。

本课题通过全面收集古今文献，对主要用于辛散解表祛邪的所谓“风药”，进行了系统梳理与研究，表明风药具有较为明显的活血化瘀作用，风药与活血化瘀方药配伍具有较显著的增效功能。.实验研究方面，本课题以肝纤维化大鼠模型为研究对象，引入信号通路调控的思路与策略，并全面开展对肝血清纤维化指标、肝组织匀浆相关指标研究，比较下瘀血汤加各风药不同剂量组、单独风药组、下瘀血汤组、秋水仙碱组、病理模型组、正常对照组在整体、组织、生化及分子生物学等方面的异同，全面探索风药对活血化瘀方药增效的机理。研究发现：光镜下可见下瘀血汤组和加风药组大鼠能有效改善肝组织病理状态，且加风药组优于下瘀血汤组。肝细胞电镜下见秋水仙碱组、风药组和下瘀血汤组都能抑制细胞器变性，但风药组的效果更为明显。通过CTGF 、PDGF、TGF--β1、SOD、MDA、Hyp各指标检测，发现单独风药组、下瘀血汤组及其加风药组大鼠血清HPC-Ⅲ、ColⅥ、LN含量，CTGF 、PDGF、TGF--β1等相关因子、以及Hyp、MDA、SOD含量均较模型组明显降低。提示单独风药组、风药加下瘀血汤、下瘀血汤均能有效降低肝纤维化大鼠的多项指标。通过基因芯片检测发现，与模型组比较单独风药组显著改变的通路有19条，主与炎症反应、免疫反应、脂肪代谢、凝血功能等有关；防风12克加下瘀血汤组显著改变的通路有25条，主与细胞凋亡、炎症和免疫反应，细胞增殖、细胞分化，细胞外基质以及凝血相关；下瘀血汤组显著改变的通路有4条，主与免疫反应、细胞基质调节以及维生素的代谢相关；秋水仙碱组显著改变通路5条，主与脂肪代谢、免疫反应等有关。同时TGF—β1在各组间差异不显著，仅有TGF—β3在单独风药组与病理模型组的比较中有显著差异。提示单独风药组、防风12克加下瘀血汤、下瘀血汤、秋水仙碱等组均能通过调节相关的通路发挥抗纤维化作用，但风药组、防风12克加下瘀血汤组改变的通路较多，即使在相同的通路中，亦涉及到多个位点，说明风药通过多途径，多靶点发挥抗纤维化作用。.实验表明风药组、各风药与下瘀血汤药物配伍对大鼠肝纤维化均有一定的抑制作用，各风药配伍下瘀血汤可在一定程度上增加活血化瘀药的作用，为中医药抗肝纤维化、特别是治疗血瘀证提供了新的用药配伍思路，也为风药的后续研究奠定了基础。.