去分化软骨肉瘤中SOX9、RUNX2与TCF1蛋白相互作用的机制研究

软骨肉瘤是常见的原发恶性骨肿瘤，术后复发的病例易发生去分化改变，去分化软骨肉瘤预后极差，对放化疗不敏感，其去分化机制尚未明确。我们前期研究表明去分化软骨肉瘤中SOX9基因低表达而RUNX2基因高表达，两者都是决定软骨细胞分化的关键基因，参与了软骨肉瘤去分化的改变过程，而TCF1在去分化软骨肉瘤细胞系中表达增高。文献报道表明SOX9与TCF1之间有相互抑制作用，而RUNX2则受到TCF1的上调，我们通过蛋白芯片技术筛选到两者都可能与TCF1发生蛋白相互作用，但需要进一步证实。本课题拟通过GST pull-down技术检测SOX9、RUNX2与TCF1的蛋白相互作用，并利用荧光素酶报告基因技术、CHIP技术、EMSA技术明确其蛋白作用的具体机制；利用siRNA技术通过体外及体内实验研究TCF1在软骨肉瘤去分化中对SOX9、RUNX2的作用，初步揭示软骨肉瘤去分化的机制。

软骨肉瘤（CS）是常见原发恶性骨肿瘤，术后复发的病例易发生去分化改变，去分化软骨肉瘤（DDCS）预后差，其去分化机制尚未明确。本项试验应用western blot 检测临床标本（8例普通软骨肉瘤标本，8例去分化软骨肉瘤标本）中TCF-1的表达情况，并应用免疫组化检测85例不同级别软骨肉瘤及去分化软骨肉瘤病理切片中TCF-1的表达情况。并分析其与患者临床预后之间的关系。结果表明，TCF-1在去分化软骨肉瘤中的表达水平高于普通软骨肉瘤，且TCF-1表达水平高者，其临床预后较差。然后，我们进行了荧光素酶报告基因（luciferase）、染色质免疫共沉淀（chip）、电泳迁移率变动分析实验（EMSA），其结果表明，TCF-1可以正向调控runx2的表达，负向调控sox9的表达，且TCF-1与runx2的启动子区有直接结合作用，而与sox9启动子区无直接结合作用。最后，我们应用敲除TCF-1的去分化软骨肉瘤细胞系（NDCS-1）及过表达TCF-1的普通软骨肉瘤细胞系（SW1353）进行体内外侵袭性试验。其结果表明，TCF-1下调后，NDCS-1细胞系的增殖能力显著下降，凋亡水平明显增加，成瘤能力显著下降，细胞表型也发生相应改变，而在TCF-1过表达的SW1353细胞系中结果则相反。该实验结果表明，TCF-1在去分化软骨肉瘤的发生中起到重要的作用，其作用可能是通过调控runx2和sox9的表达而实现，该分子有望成为预示软骨肉瘤患者临床预后的一个重要指标，且其有望成为去分化软骨肉瘤药物治疗的一个有效靶点。