磷酸酯酶在HSP70抑制LPS所致炎症反应中的作用研究

本项目从磷酸酯酶角度探讨HSP70抑制NF-κB活化及炎症反应的机制。采用LPS刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞诱发炎症反应。通过转染HSP70基因或其反义寡核苷酸，观察HSP70过表达或表达抑制对LPS所致炎症介质表达、ΙκB降解、NF-κB/P65核移位的影响，并采用EMSA及荧光素酶报道基因技术研究HSP70对NF-κB的DNA结合活性及转录活性的影响。应用酶催化其底物反应的原理，分析巨噬细胞经HSR或转HSP70基因后磷酸酯酶总活性及磷酸酯酶2A（PP2A）活性的变化。采用免疫共沉淀技术，探讨HSP70是否与PP2A或ΙκB激酶（ΙKK）的亚单位具有相互作用，在此基础上进一步进行蛋白质相互作用的功能结构域分析。采用无细胞体系，在体外观察HSP70对PP2A或ΙKK活性的影响。开展本研究可望发现HSP70控制炎症反应的新的重要靶分子，为SIRS等炎症性疾病的防治提供新思路。