miRNA-34在弥漫大B细胞淋巴瘤发病机制中的作用研究

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的淋巴瘤，其病理亚型和治疗方法研究取得了较大进展，但总体疗效不甚理想，需进一步明确其发病机制，从而更有针对性地进行靶向治疗以提高临床疗效。最近发现：miRNA-34(miR-34)是p53直接靶标，p53基因通过miR-34诱导细胞凋亡和周期阻滞，miR-34表达减低或缺如的DLBCL患者预后差。本项目拟①研究DLBCL中miR-34异常表达及是否存在甲基化对此的调控；②应用生物信息学方法和基因表达谱数据筛选miR-34作用的靶基因，采用荧光素酶报告系统确定靶基因；③运用小分子RNA转染和构建携带小分子RNA慢病毒载体，在体外细胞水平和模式生物体水平进行p53-miR-34通路及功能研究。通过研究阐明DLBCL中miR-34家族在p53肿瘤抑制网络中的作用，从一个新的角度揭示DLBCL的分子发病机制，为利用恢复miR-34功能的靶向治疗提供理论依据。

miRNA-34(miR-34)是p53直接靶标，p53基因通过miR-34诱导细胞凋亡和周期阻滞，但miR-34异常表达及其调控在弥漫大B细胞淋巴瘤发病机制中的作用尚不清楚，miR-34如何参与p53肿瘤抑制网络的调节、p53-miR-34的靶基因是什么、p53-miR-34在发病机制中的作用等问题成为开展本研究的目的。本项目研究了①淋巴瘤中p53基因异常，包括p53基因缺失、p53基因突变、p53功能检测、p53 codon 72 SNP、MDM2 SNP309在淋巴瘤中预后意义；②建立定量RT-PCR检测miR-34a方法、弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清miR-34水平、甲基化对miR-34的表达调控、miR-34a在淋巴瘤中的表达及预后意义；③p53-miR-34通路在淋巴瘤发病中的作用机制。研究发现p53基因异常在恶性淋巴瘤，尤其在弥漫大B细胞淋巴瘤中具有重要预后意义；弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清miR-34a、miR-15a、miR-16-1、miR-155、miR-29c表达与健康对照组具有显著差异；弥漫大B细胞淋巴瘤DB细胞株经5-AzaCdR处理后miR-34a表达显著升高；根据生物信息学方法 (miRanda、TargetScan和PicTar)和miRNA靶基因数据库(http://www.sanger.ac.uk/) 候选出包括 BCL-2、MCL-1、TCL-1和XIAP的与弥漫大B细胞淋巴瘤发病机制相关的miR-34a靶基因；双荧光素酶报告基因确定靶基因，BCL-2、MCL-1和XIAP为miR-34下游的靶基因；miR-34a与p53密切相关，p53基因异常(突变或缺失)患者的miR-34a表达水平显著下降，MDM2 SNP 309 G/G基因型与miR-34a的表达水平负相关，体外转染miR-34a使其过表达能诱导CLL细胞凋亡，但依赖p53通路。通过研究阐明弥漫大B细胞淋巴瘤中miR-34在p53肿瘤抑制网络中的作用，从一个新的角度揭示了分子发病机制，为利用恢复miR-34功能的靶向治疗提供理论依据。