婴儿CMV肝炎的病证代谢组学研究

Cytomegalovirus (CMV) hepatitis is the most common during the neonatal and infant periods. In our previous studies, Chinese medical syndrome differentiation of infantile CMV hepatitis has been established by a lot of clinical and basic research. The study shown that the presence of CMV hepatitis with different syndromes has their different biological characteristics; such biological characteristics affected the clinical outcome to a certain extent. And metabonomics based on TCM syndrome differentiation of macroscopic, can interpret the body's internal microscopic changes, which is to play the advantages of microcosmic syndrome differentiation. For the further study of the relevance about infantile CMV hepatitis in TCM syndromes and metabonomics, the project intends to adopt the technology of liquid chromatography - mass spectrometry (LC - MS) combination, studies of different syndromes CMV hepatitis serum, urine metabolomics features, regular and express differences, roundly analyzes its characteristic metabolic pattern, finds characteristic metabolic spectrum, establish the related metabolic fingerprint feature atlas database, discusses the pathogenesis, through the contrast analysis for the various biomarkers detection of the normal infants.

本项目组通过大量婴儿CMV肝炎中医药有效性的临床验证和中药有效方剂的基础研究，不断发展、完善了中医药对婴儿CMV肝炎的辨证论治体系，制定了《中医儿科常见病诊疗指南o胎黄》。前期研究发现，CMV肝炎患儿不同证候分类存在各自的证候特点和生物学特性，而代谢组学方法可在中医证候宏观辨证的基础上，阐释机体的内在微观变化，即发挥微观辨证的优势。为进一步研究婴儿CMV肝炎不同中医证候与代谢组学的关联性，本项目组拟采用液相色谱-质谱（LC-MS）联用的技术方法，通过对正常婴儿各项生物标记物检测的对照分析，研究CMV肝炎不同证候患儿间、与正常婴儿间血清、尿液的代谢组学特征、规律及表达差异，全面分析其特征性代谢模式，发现特征性代谢物谱，建立证相关指纹代谢特征图谱库，进一步探讨婴儿CMV肝炎的发病机制。

本项目组前期研究发现，婴儿CMV肝炎不同证候存在各自的证候特点和生物学特性，而代谢组学方法可在中医证候宏观辨证的基础上，阐释机体的内在微观变化，已成为中医证候标准化研究的有力工具。本研究以婴儿CMV肝炎为切入点，采用超高效液相色谱-质谱联用（UHPLC-LTQ/Orbitrap-MS）技术和气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术及血浆上下层、尿液正负离子检测、主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析等统计学方法，对婴儿CMV肝炎湿热内蕴证、脾虚湿困证及气滞血瘀证患儿的血浆、尿液样本进行代谢组学检测，并与正常婴儿检测结果相对照。结果发现：婴儿CMV肝炎各证型组与正常组比较，液质下尿液生物标志物共同差异性代谢物19个，分别为DL-肉碱、鸟氨酸、戊二酸、甘油磷酸胆碱等，主要涉及丙氨酸，天门冬氨酸和谷氨酸代谢、D-精氨酸与鸟氨酸代谢、组氨酸代谢、精氨酸与脯氨酸代谢4条氨基酸代谢通路的异常；血浆共同差异性代谢物31个，其中23个为甘油三酯（Triglyceride, TG）；气质下尿液差异性代谢物29个，均涉及了多种氨基酸代谢、能量代谢及肠道菌群相关代谢物紊乱。同时，婴儿肝炎综合征组及胆道闭锁组与正常组相比较，共涉及19个共同差异代谢物，其中2-丁炔-1,4-二醇（2-butyne-1-4-diol）、α-氨基己二酸（α-AAA）、N-乙酰基-D-甘露糖胺（ManNAc）及鸟苷（guanosine）是区分胆道闭锁和婴儿肝炎综合征的潜在的生物标志物。本项目初步研究了婴儿CMV肝炎不同证候患儿间、与正常婴儿间血清、尿液的代谢组学特征、规律及表达差异，筛选出婴儿CMV肝炎湿热内蕴证、脾虚湿困证、气滞血瘀证患儿血清、尿液的差异性代谢物，发现了部分特征性的代谢物谱，初步建立了婴儿CMV肝炎不同中医证候的证相关代谢谱数据库；分析了其特征性的代谢模式，探讨了婴儿CMV肝炎湿热内蕴证、脾虚湿困证、气滞血瘀证患儿与正常婴儿生物标记物的差异。为进一步研究婴儿CMV肝炎的发病机制、阐述中医证候的生物学本质及提高临床辨证论治水平提供了一定依据。