应激性胃肠肽-血管加压素在溃疡性结肠炎肠动力异常中的作用

Vasopressin (VP) is an important peptide in central nervous system, which can be increased by many stressors including inflammation. It is traditionally recognized as a vasoconstrictor and antidiuretic hormone. Recent studies suggest that VP also play an important role in the regulation of gastrointestinal motility. Our previous results confirm that VP (V1a) receptor is expressed in myenteric plexus as well as VP, which synthesis is upregulated in ulcerative colitis (UC). And exogenous VP inhibited the rhythmic phasic contractions of circular muscle in rat colon. Therefore, we speculate that VP, as a new type of stress peptide of gut, synthesized in digestive tract itself, play a role in the motility disorder in UC. This research will be performed based on animals with TNBS-induced colitis or V1a gene deficient, and related human specimens, by using PCR, immunofluorescence double labeling, ELISA, confocal laser and in vitro muscle strip tension recording techniques from the following three aspects: 1 Confirm the type of cell synthesing the endogenous VP; 2 Verify the stimulating factor for endogenous VP increased in UC; 3 Study the role of VP in colon motiltiy disorder in UC. The results of this study will provide the improtant proof for understanding of colon motility disorder in UC and clinical treatment.

血管加压素（VP）是中枢系统内重要的信号肽，经典作用是抗利尿和收缩血管，炎症等多种应激刺激可诱导其合成增多。近期研究发现VP在胃肠道动力调节中亦发挥重要作用。我们前期结果证实：①外源性VP通过V1a受体途径能够抑制离体结肠肌条节律性收缩；②结肠肌间神经丛内有VP和V1a受体表达，溃疡性结肠炎（UC）时肠组织内VP合成增加。我们推测VP可能是一种新型应激性胃肠肽，与V1a受体结合后参与UC肠动力异常过程。国内外对此尚无报道。本课题拟利用TNBS结肠炎大鼠、V1a基因缺陷鼠及相关人体标本，采用PCR、免疫荧光双标、ELISA、激光共聚焦检测及离体肌条张力记录等技术从三方面对上述假设进行探索：①明确肠道内源性VP合成细胞；②探索UC时肠内源性VP应激性合成增多的诱导因子；③研究VP/ V1a受体通路在UC肠动力异常中的作用，以期为UC患者肠动力障碍的研究及临床靶向治疗提供理论支持。

研究背景：炎症性肠病（IBD）是一种肠功能异常，具有慢性病程及易复发的临床特征。 血管加压素（VP）是机体内一种水钠及血压状态平衡激素，同时它还参与胃肠道炎症及运动功能调节。本课题我们探讨了VP是否与IBD发生发展相关及其分子通路。.方法：我们利用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）对小鼠进行灌肠处理，采取该方式建立溃疡性结肠炎动物模型。 实验中通过炎症活动指数和结肠形态学评价系统对动物炎症程度进行评估。 通过免疫化学方法明确结肠内V1a受体的定位。 利用尤斯灌流系统检测动物回肠粘膜离子转运的电生理学特征。在探索相关分子通路的过程中，我们采用了多种药物处理，包括conivaptan（V1a和V2受体拮抗剂），tolvaptan（V2受体拮抗剂），河豚毒素（TTX），阿托品，（Arg8） - 加压素（AVP），吲哚美辛（非特异性环加氧酶COX拮抗剂），SC560，（COX-1 抑制剂），NS560（COX-2拮抗剂）和肥大细胞稳定剂（色甘酸钠）。.主要结果：TNBS导致小鼠出现明显体重减轻和肠道组织学损伤。 AVP显著加重了溃疡性结肠炎动物炎症体征，该作用可以被V1a受体阻断剂conivaptan减弱，但V1b受体阻断剂不具有此效果。 通过免疫组化技术，我们发现在肠神经系统中有V1a受体免疫阳性的表达。 在粘膜离子转运实验中，结果显示AVP能够诱导粘膜发生脉冲式离子流Isc。 离子流的振幅，频率和循环持续时间分别约为8-15μA/ cm2,10-11mHz和1.5分钟。 值得注意的是，分别使用TTX，阿托品，conivaptan，吲哚美辛，NS560和色甘酸钠能够消除了AVP诱发肠粘膜Isc的作用。.结论：VP通过与肠神经丛内胆碱能神经元V1a受体相结合的途径参与溃疡性结肠炎的发生发展过程。VP的这种促炎作用与增加肠粘膜肥大细胞释放COX-2依赖性前列腺素，而导致粘膜离子分泌增多密切相关。本研究结果证实VP-V1a通路参与溃疡性结肠炎肠功能异常的发生发展。后续相关靶位点的探索将为UC临床精准治疗提供重要依据。