中藏药治疗高原红细胞增多症的多靶点筛选评估系统研究

高原红细胞增多症（HAPC）发病率高，药物治疗的突破点在于建立科学且针对性强的药物评估系统和实验体系。中藏医药治疗HAPC颇具优势，具有整体调节和标本兼治的特点。在前期研究基础上，提出"中藏药抗高原缺氧是其有效组分对缺氧细胞与ROS、HIF-1α基因信号转导等多个靶点作用的整合"的假说；选择治疗HAPC临床疗效确切的中藏药为研究对象，应用轴向制备型HPLC、UPLC-QTOF/ESI-MS、NMR等进行分离解析，通过UPLC-DPPH-MS在线初筛抗氧化有效组分，并基于ROS、HIF-1α、EPO等缺氧关键细胞信号通路进行有效性筛选，最终以模拟高原环境的低压舱整体动物模型进行特异性验证，以期构建一种体现多途径（现代色谱质谱联用手段与生物验证相结合）、多层次（基因、细胞和动物）、多靶点（宏观药效与微观机制指标）的药物筛选方法平台和体系，将极大地推动具有自主知识产权治疗HAPC药物的研究与开发

高原红细胞增多症（HAPC）是高海拔地区常见病和多发病，起病隐秘，呈慢性过程，病人常说不出准确的发病时间，多在逐渐发生缺氧症状后才就医。随着病情的发展，可逐渐引起全身多系统的损害。HAPC药物治疗的突破点在于建立科学且针对性强的药物评估系统和实验体系。中藏医药治疗HAPC 颇具优势，具有整体调节和标本兼治的特点。.本项目以藏医理论为指导，以临床疗效为核心：①采用中药化学、中药药理学和细胞分子生物学等研究手段，克服单一机制的以往研究模式，选择临床治疗高原红细胞增多症疗效确切的中药、藏药材及藏药方剂为研究对象；②采用DPPH-TLC生物自显影技术筛选樱草杜鹃和沙棘膏的抗氧化有效组分；③采用硅胶柱层析梯度洗脱，分离樱草杜鹃抗氧化有效部位得到β-谷甾醇、金丝桃苷、槲皮素、伞形花内酯、槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷6个化合物；④在对藏药樱草杜鹃的抗氧化组分进行筛选的基础上，建立其体外HPLC指纹图谱及体内血清指纹图谱，探索其入血成分；⑤采用HPLC柱前衍生结合TLC-生物自显影技术，建立了抗氧化活性成分快速筛选方法；⑥模拟HAPC动物模型，开展了藏药复方多血康治疗HAPC的研究；⑦采用小鼠游泳实验，筛选了藏药蔓菁、红景天、余甘子“缓解体力疲劳”有效剂量范围；⑧采用正交实验设计，优化了藏药蔓菁抗氧化活性多糖的制备工艺；⑨采用MTT法和LDH法检测人胚肾细胞株（HEK293）、人肝细胞株（HL）、人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、等细胞株在低氧条件下的活力，建立低氧损伤细胞模型，并对前期分离得到的化合物进行筛选；⑩通过开展藏药经典方“活血养气散”和“五味锦鸡儿汤”临床疗效对比研究，进一步明确了2组成药疗效，并对配方提出了修改意见。.本项目在前期实验研究的基础上，申请国家发明专利1项，发表期刊论文8篇，发表相关会议文章24篇，培养硕士研究生3名，在培研究生3名。.本项目将HPLC柱前衍生与TLC-生物自显影技术相结合，可较全面的筛选药物的抗氧化活性组分，建立一种快速筛选药物抗氧化活性的新方法，极大地推动具有自主知识产权的治疗HAPC 药物的研究和开发。