前列消汤干预自身免疫性前列腺炎TGF-β1/Smads通路调控Th17、PrF细胞分化的研究

Chronic Prostatitis (CP) which is characterized by abnormal micturition and chronic pelvic pain is an intractable inflammatory disease. Autoimmune factor maybe its main pathogeny, and glands fibrosis made it refractory. Previous studies found that, Qianliexiao decoction reduced the expression of IL-17 and glands fibrosis degree in EAP mouse model’s.Therefore the clinical therapeutic effect of Qianliexiao decoction in CP was definite.base on the previous researches, make TGF-β1/Smads related signaling pathway research as the breakthrough point, this research will start from the key points of regulating the differentiation of Th17 and PrF.After EAP model was intervened by Qianliexiao decoction,Detecte TGF-β1/Smads pathway and IL-17A ，RORγt，Foxp3，Collagen protein expression through ELISA and WB and Fluorescence quantitative PCR. Analysis the th17 count and PrF cell cycle phase using flow cytometry; determinate hydroxyproline content by ultraviolet spectrophotometry.Observation on whether Qianliexiao decoction has two-way adjustment function on TGF-β1, discusses the TGF-β1 / Smads related pathways specific mechanism, analysis of gland pathological link between inflammation and fibrosis, provided the scientific basis for the research of TCM intervention of CP.

慢性前列腺炎(CP)是表现为排尿异常及慢性盆腔疼痛为主的一种难治性炎症疾病。自身免疫因素可能是其主要病因，而腺体纤维化则是其难治的重要原因。前期研究发现，前列消汤治疗CP疗效确切，可降低EAP小鼠前列腺内IL-17的表达水平、降低腺体纤维化程度。本项目在前期基础上，以TGF-β1/Smads相关信号通路为切入点，从调控Th17和PrF分化的关键环节出发。运用ELISA、WB、荧光定量PCR等技术检测前列消汤对EAP模型TGF-β1/Smads通路及下游IL-17A、RORγt、Foxp3、胶原蛋白的表达；MTT法检测PrF增殖情况；流式细胞术检测Th17计数及PrF细胞周期时相；紫外分光光度法检测羟脯氨酸含量。观察前列消汤对TGF-β1是否具有双向调节作用，探讨其对TGF-β1/Smads相关通路具体的作用机制，分析腺体炎症与纤维化之间的病理联系，为中医药干预CP的研究提供科学依据。

慢性前列腺炎（CP）是常见男性泌尿生殖系统疾病，自身免疫因素可能是慢性非细菌性前列腺炎的主要病因，由炎症引起的前列腺成纤维细胞（PrF）增殖形成前列腺体实质纤维化，使药物难以渗透进入腺体内发挥作用，是导致CP具有高复发、低治愈率特点重要因素。TGF-β1作用较为复杂，主要通过膜受体和Smads信号通路发挥作用，并对Th17及成纤维细胞分化均有较强调控能力。前期研究表明前列消汤可降低EAP小鼠前列腺内的IL-17表达，可降低前列腺纤维化程度。因此假说：前列消汤对TGF-β1有双向调节作用，可通过TGF-β1/Smads相关通路调节CP自身免疫性炎症反应、抑制PrF增殖，实现对CP治疗作用。.课题主要研究EAP湿热证病证结合小鼠模型制作方法及前列消汤通过干预TGF-β1/Smads相关通路调控自身免疫相关因子治疗CP作用机制。模型研究：采用“前列腺蛋白提纯液+弗氏完全佐剂+中医湿热证候因素”复合造模法制作EAP湿热证病证结合小鼠模型。在体实验研究：运用免疫组化法、WB等技术检测EAP小鼠前列腺组织中TGF-β1、TGF-β1RⅠ、Smad4的表达水平及Smad2、3、7磷酸化水平和下游IL-17A、Foxp3、RORγt和PrF表达水平。离体实验研究：WB检测TGF-β1、Smad4表达水平及Smad7磷酸化水平、流式细胞术检测各组PrF凋亡情况。临床试验研究：观察治疗前列消汤对CP患者NIH-CPSI评分和中医证候评分以及EPS-WBC、EPS中IL17及Foxp3指标变化情况。.结果发现：采用“前列腺蛋白提纯液+弗氏完全佐剂+中医湿热证候因素”复合造模法可制作EAP湿热证病证结合小鼠模型。经湿热消汤干预EAP湿热证小鼠可抑制IL-17、RORrt、NF-κB P65和P50表达，提高Foxp3表达。经TGF-β1诱导可刺激PrF细胞增殖，上调TGF-β1、p-Smad4表达，下调p-Smad7的表达。前列消汤可以抑制PrF增殖，降低TGF-β1和p-Smad4表达、提高p-Smad7的表达。经前列消汤含药血清干预能显著下调PrF细胞内p-Smad4，TGF-β1蛋白的表达，而增加p-Samd7的表达水平。前列消汤治疗CP患者能有效降低前列腺液中IL-17表达、提高Foxp3表达。由此推断，前列消汤治疗CP的作用机制可能是抑制Th17分化、促进PrF细胞凋亡而实现。