调控Toll样受体信号通路的miRNAs内遗传变异与肺结核关联性及其分子机制研究

Toll样受体(TLRs)信号传导通路是宿主识别和清除病原体与病原体免疫逃逸的共同途径之一。本课题组研究发现调控TLRs信号传导的pre-miR-146a内SNP rs2910264使中国人对肺结核更加易感，结合miRNA序列内SNPs导致疾病表型变化的最新研究成果，推测调控TLRs信号传导的miRNA内SNPs与肺结核的死灰复燃及其日益严重的耐药具有关联。拟运用生物信息学筛选调控TLRs信号通路候选miRNAs，miRNA芯片等技术筛选和确证结核病候选miRNAs差异表达谱，检索miRNAs序列内SNPs, 群体遗传学技术筛查SNPs与肺结核患病风险的相关性；构建miRNAs表达载体，分子及细胞实验探索差异性SNPs对miRNAs生成、表达及作用的影响，阐明SNPs与肺结核患病风险关联性的分子机制，揭示miRNA调控TLRs信号传导机制，为结核病原体感染的早期筛查与防治提供理论依据。

结核病仍是全球最常见和最重要的感染性疾病之一。随着人口移动增加、人类免疫缺陷病毒（HIV）感染和艾滋病(AIDS)的流行及多重耐药和泛耐药结核株的出现,结核病成为21世纪全球重大的公共卫生问题。MicroRNA(miRNA)是一类的内源性非编码高度保守的小分子单链RNA，通过作用于靶基因mRNA特异的调控基因的表达。研究表明，差异性miRNA (microRNA)与疾病的发生发展可能有关。1）通过运用microRNA基因芯片技术高通量的筛查结核感染与正常人群外周血单个核细胞中miRNA差异性表达谱，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)确证部分感染相关差异性miRNA，揭示结核感染者外周血单个核细胞中microRNA的差异表达与疾病发生发展的关系。结核患者与健康对照组相比，外周血单个核细胞中差异性microRNA共 84个，其中上调的microR NA 2个，下调表达为82个，随后选出与感染有关的四条通路：Phagosome (P= 0)、Nod-like receptor signaling pathway (P=0.002797)、Tuberculosis(P=0.0093)、T cell receptor signaling pathway(P=0.008123)，其中与与感染相关的差异性miRNA基因有11种，并对之进行表达验证。2）本课题组研究发现能调控Toll样受体信号传导的pre-miR-146a序列内SNP rs2910264使中国人对肺结核更加易感。3）结核感染及耐药相关血中18种miRNA表达水平确证及诊断价值前期研究，发现利福平耐药结核和利福平敏感结核miRNA表达水平无统计学差异，而在异烟肼耐药和异烟肼平敏感结核中11个miRNA表达水平有统计学差异。目前，课题组正在进行1）结核相关的特异性microRNA标志物筛选及结核早期分子诊断试剂盒研究。2）miRNA启动子区结合组蛋白H3赖氨酸4甲基化调控结核分枝杆菌诱导巨噬细胞细胞凋亡的机制研究。 在本课题支持下，课题组已发表论著近十篇，已培养研究生4名，14篇国际学会会议投稿被接收，参加国际会议5人次，并且其中大会分会专题报告一次。