JNK信号通过上调自噬促进CD8+T细胞增殖介导肝移植急性排斥反应

The acute rejection after liver transplantation is mediated by T lymphocyte with uncertain mechenisms.Our previous studies on rat liver transplantion model show that the apoptosis of CD8+ T cells correlates negatively with the severity of the acute rejection after liver transplantation. Studies on liver tissues from the liver transplant patients with acute rejection also show that the autophagy of CD8+T cells correlate positively with the severity of the acute rejection after liver transplantation. Previous study showed that JNK can mediate autophagy.Our previous mouse unidirectional mixed lymphocyte culture experiment revealed that JNK signaling may promote proliferation of CD8+T cells by upregulating its autophagy. Thus, we speculate that JNK signaling mediates the acute rejection after liver transplantation by promoting CD8+ T cell proliferation through upregulating its autophagy.Here we are going to verify our speculation by using clinical samples, cell culture and acute rejection model of liver transplantation of gene knockout mice, and reveal furtherly the mechanisms of acute rejection after liver transplantation.

肝移植急性排斥反应主要由T细胞介导,其机制尚不完全清楚。我们前期在大鼠肝移植急性排斥模型的研究中发现：CD8+T细胞凋亡与急性排斥反应程度呈负相关，抑制自噬能够促进CD8+T细胞凋亡从而减轻大鼠肝移植急性排斥反应。对人肝移植急性排斥反应肝穿刺标本检测显示CD8+T细胞自噬与排斥反应程度呈正相关。提示自噬能促进CD8+T细胞增殖和抑制其凋亡而介导肝移植急性排斥反应。既往研究证实JNK信号激活能够激活细胞自噬。我们在小鼠单向混合淋巴细胞培养实验也发现JNK信号可能通过诱导CD8+T细胞自噬而促进其增殖。我们由此推测：JNK信号可能通过上调自噬促进CD8+T细胞增殖而介导肝移植急性排斥反应。本项目拟用临床病例标本、基因敲除小鼠单向混合淋巴细胞培养和肝移植排斥反应模型验证这一科学问题，进一步揭示肝移植急性排斥反应机制。

背景：肝移植排斥反应仍是严重影响肝移植病人预后的重要因素之一。我们前期研究证实促进CD8+T细胞凋亡可以有效减轻肝移植排斥反应，这有望成为减轻排斥反应、提高移植生存率的有效临床手段。但对于肝移植排斥反应中CD8+T细胞凋亡的具体分子机制仍知之甚少，深入探讨其机制并探索靶向药物治疗方案，将为临床肝移植排斥反应的防治提供理论依据。.方法：检测分析临床肝移植术后急性排斥反应病人肝组织和外周血CD8+T细胞的相关基因蛋白表达情况，及其与移植排斥反应肝损伤的关系；构建体外单向混合淋巴细胞培养模型，分析比较CD8+T细胞基因表达水平，及其与CD8+T细胞的凋亡水平的关系；构建大鼠肝移植排斥模型，收集移植术后3、7、9d大鼠血清及肝组织标本，通过肝功能检测、肝组织病理学分析判断肝脏损伤程度，TUENL染色、流式分析及蛋白免疫印迹等分析肝细胞增殖、凋亡情况，免疫组化及荧光染色、流式分析、电镜等方法进一步检测相关基因及其信号通路的表达情况。.结果：临床肝移植排斥标本检测发现，JNK信号和CD8+T细胞自噬水平显著正相关；同时构建大鼠肝移植排斥模型和体外混合淋巴细胞培养模型，进一步证实JNK抑制剂SP600125通过抑制JNK信号下调CD8+T细胞自噬水平并促进其凋亡，从而显著减轻大鼠肝移植排斥反应。此外，我们进一步深入探讨JNK信号调控CD8+T细胞自噬的分子机制，初步证实JNK可能通过上调BECN1抑制Bcl-2 /BECN1复合体的形成激活CD8+T细胞自噬。.结论：JNK信号激活CD8+T细胞自噬介导肝移植术后急性排斥反应。.科学意义：本项目从临床、体外和体内实验三个层面深入揭示了肝移植排斥反应中CD8+T细胞凋亡的具体分子机制，有望进一步揭示肝移植排斥反应机制，为寻找新的防治排斥反应的药物靶点提供理论依据。.