塑化剂影响小鼠卵母细胞发育与成熟的分子机制研究

DEHP, Di(2-ethylhexyl)phthalate,is an environmental estrogen.In humans,there is widespread exposure to DEHP.Full studies have shown that DEHP has biological toxicity on the male animal and man.Poisoning mechanism and influencing factors of DEHP effect on the female has not been studied, and the molecular mechanism of DEHP effect on DNA methylation of imprinted genes in oocyte has not been reported. In the present study,mice were used as model organisms,by making contact with animals of DEHP (such as drinking water containing DEHP, etc.) to study the molecular and cellular mechanisms of DEHP affect on the folliculogenesis of female animals. Exploration of DEHP exposure modifies formation,proliferation and differentiation of primordial germ cells in femal fetal genital ridge and meioticoogonia start via the estrogen receptor signaling pathway.Explore DEHP affect the germ cell cyst breakdown, the establishment of contact of the oocyte and granulosa cell precursors and the formation of primordial follicles.Explore DEHP affect follicle development and oocyte maturation via the level of DNA methylation of imprinted genes. The study will provide a throretical basis in DEHP harm to human reproductive health.

人类在生活环境中广泛的接触塑化剂DEHP（邻苯二甲酸（2─乙基己基）二酯），研究表明DEHP是一种环境类雌激素，其对雄性生物具有毒性作用，但其对雌性生物的影响和毒害机制研究较少，且DEHP在卵母细胞发生过程中影响印迹基因DNA甲基化的分子机制还未见报道。本项目组以小鼠为模式动物，通过使动物接触DEHP（如饮用含有DEHP的水等），研究DEHP影响雌性动物生殖细胞发生的分子细胞机制。探索DEHP通过ER信号通路对雌性胎儿生殖嵴中原始生殖细胞的形成、增殖和分化，以及卵原细胞减数分裂启动的影响；探索DEHP影响生殖细胞Cyst解聚、卵母细胞与颗粒细胞/前体细胞联系的建立，及原始卵泡形成的机制；研究DEHP通过影响印迹基因DNA甲基化水平调节卵泡发育与卵母细胞成熟的机制。该项目将为探明DEHP危害人类生殖健康的发生、发展等问题提供理论依据。

塑化剂DEHP是一种环境类雌激素，人类在生活环境中广泛地接触DEHP，因此DEHP的安全性问题成为了近年来人类健康研究和讨论的焦点。本项目以卵巢的体外培养和小鼠的体内实验，研究了DEHP对原始卵泡形成、印迹基因甲基化、卵原细胞减数分裂启动和卵母细胞成熟的影响。研究结果如下：①以7日龄新出生雌性小鼠为实验对象，在哺乳期以腹腔注射的方式处理小鼠，发现DEHP显著地降低卵巢中原始卵泡的数量，促进卵巢早衰，并在F1代中具有遗传性；DEHP抑制卵母细胞中印迹基因甲基化的再建立进程；导致卵母细胞染色体组装的异常。②处理孕鼠的结果发现：在胎鼠的12.5dpc时，DEHP促进了印迹基因甲基化的擦除，在F1代和F2代的21dpp时，Igf2r和Peg3甲基化的建立同样被抑制，具有遗传传递性；DEHP抑制了卵母细胞的第一次减数分裂进程；经DEHP处理后，在F1代和F2代21dpp中原始卵泡的数量显著地降低，且DEHP促进了卵泡募集，加速了卵泡池的耗竭。③DEHP体外培养出生后三天小鼠的卵巢，结果发现：DEHP生殖细胞巢破裂与原始卵泡的组装可以促进卵巢细胞的凋亡，降低凋亡相关基因Bax的表达；并抑制了生殖特异转录因子等基因的表达；将实验组的卵巢进行成年鼠的肾包囊移植，移植21天后，经DEHP处理后的卵巢中卵母细胞的数量显著的降低。④以七日龄的雄鼠为研究对象，腹腔注射DEHP处理至21、35和49天，结果发现：在60日龄时，DEHP显著地降低小鼠精子的数量和质量，同样与精子发育相关基因的表达被显著地降低。通过本项目的研究，为研究DEHP危害人类生殖健康的发生、发展等问题提供了理论依据，也为DEHP的正确和规范应用提供了有益的参考资料。