HLA-G5在骨髓间充质干细胞免疫调节功能中的作用及其机制研究

骨髓间充质干细胞（MSC）具有强大的造血支持和免疫调节作用，已广泛应用于造血干细胞移植，并作为防治移植物抗宿主病（GVHD）的有效手段之一，但其发挥免疫抑制作用的具体机制目前并不十分清楚。人类白细胞抗原-G（HLA-G）是一种免疫抑制分子，具有诱导移植免疫耐受的作用。HLA-G5是最主要的可溶性HLA-G分子，近期有研究发现MSC表达HLA-G5，并可能参与MSC的免疫调节作用。本课题通过观察MSC表达HLA-G5的生物学特征，研究HLA-G5表达差异与MSC免疫功能的相关性；应用siRNA和中和抗体分别在基因及蛋白水平阻断HLA-G5，观察对MSC免疫功能的影响；应用人-NOD/SCID异种移植物抗宿主病模型，观察阻断或上调HLA-G5水平对MSC体内免疫抑制作用的影响。如能明确HLA-G5在MSC免疫调节功能中的作用及相关机制，将为今后优化MSC临床应用方案提供研究基础。

骨髓间充质干细胞（MSC）具有强大的造血支持和免疫调节作用，已广泛应用于造血干细胞移植，并作为防治移植物抗宿主病（GVHD）的有效手段之一，但其发挥免疫抑制作用的具体机制目前并不十分清楚。人类白细胞抗原-G（HLA-G）是一种免疫抑制分子，具有诱导移植免疫耐受的作用。HLA-G5是最主要的可溶性HLA-G分子，近期有研究发现MSC表达HLA-G5，并可能参与MSC的免疫调节作用。经过课题组的努力工作，完成了以下研究内容：1）HLA-G5的体外表达及纯化。2）分离、培养了人MSC，并对其生物学特性进行了鉴定，证实MSC在体外诱导培养下具有多向分化能力，可分化为成骨、脂肪和软骨细胞，并观察了MSC培养过程中HLA-G5表达水平的变化。3）构建了HLA-G5基因siRNA真核表达质粒载体并转染MSC细胞，转染后MSC的细胞形态、生长特点、表面抗原表达均与转染前相同，且具有多向分化潜能；应用RT-PCR、Western-blot等方法检测HLA-G基因mRNA及蛋白表达水平在转染后明显下降。4）分别用中和抗体和siRNA阻断HLA-G5后，MSC对T细胞增殖的抑制作用减弱，MSC抑制Th1细胞因子分泌和促进Th2细胞因子分泌的作用减弱。5）成功建立人-NOD/SCID小鼠异种急性移植物抗宿主病模型，观察了阻断或上调HLA-G5水平的MSC对异种移植物抗宿主病的影响，体内证实了HLA-G5在MSC的免疫调节功能中发挥重要作用。上述研究为造血干细胞移植术后GVHD的防治提供新的思路，为今后优化MSC临床应用方案提供了研究基础。