MEX3C在卵泡生成过程中对IGF-1调控作用的机制研究

IGF (Insulin-like Growth Factor, IGF-1) signaling pathway plays a very important role in follicle generation. MEX3C is an RNA-binding protein coding genes,our previous studies found that high expression in the fast development of follicular granulosa cells.MEX3C defects cause IGF-1 expression defects, damage to the growth of bone growth plate. And for the first time our team discovered that female mice sexual maturity delayed due to MEX3C mutations,the follicles development under the hyperstimulation of ovulation delayed than the normal mice.This project use MEX3C knockout mice as a study model,by using super-ovulation method, overy tissue culture,granulosa cells were isolated,cultured and transfection, FISH, in situ hybridization, RT-PCR, Western-blot and immunohistochemistry to study the expression of MEX3C in granule cells in follicle development process,grouped qualitatively MEX3C mutant mice follicle developmental defects,detect IGF-1 is involved in MEX3C mutant mice with impaired follicular development,specifically through post-transcriptional mechanisms regulating MEX3C granulosa cells IGF- 1 gene expression, thereby affecting the situation of follicular development, providing a new scientific evidence for patients with the diminished ovarian reserve to improve ovarian function and restore fertility.

胰岛素样生长因子（IGF-1）信号通路在卵泡生成过程中起着非常重要的作用。MEX3C是一种编码RNA结合蛋白的基因，本课题组的前期研究发现，在快速发育卵泡的颗粒细胞中呈现高表达，MEX3C缺陷导致IGF-1表达降低，损害骨生长板的发育。并且首次发现MEX3C突变雌性小鼠性成熟延迟，其卵泡发育在超排卵刺激下也比正常小鼠延迟。本项目以MEX3C基因敲除小鼠为模型，采用超排卵方法，卵巢组织培养，通过颗粒细胞分离、培养和转染，FISH，原位杂交，Real time-PCR，Western-blot和免疫组化等技术研究卵泡发育过程中MEX3C在颗粒细胞中的表达情况，分组定性MEX3C突变小鼠卵泡发育缺陷，检测IGF-1是否参与MEX3C突变小鼠卵泡发育受损，明确MEX3C通过转录后机制调控颗粒细胞IGF-1基因表达，进而影响卵泡的发育，为卵巢储备功能减退患者改善卵巢功能和恢复生育力提供新的科学依据。

胰岛素样生长因子（IGF-1）信号通路在卵泡生成过程中起着非常重要的作用。MEX3C是一种编码RNA结合蛋白的基因，本课题组的前期研究发现，在快速发育卵泡的颗粒细胞中呈现高表达，MEX3C缺陷导致IGF-1表达降低，损害骨生长板的发育。并且首次发现MEX3C突变雌性小鼠性成熟延迟，其卵泡发育在超排卵刺激下也比正常小鼠延迟。本项目以MEX3C基因敲除小鼠为模型，采用超排卵方法，卵巢组织培养，通过颗粒细胞分离、培养和转染，FISH，原位杂交，Real time-PCR，Western-blot和免疫组化等技术研究卵泡发育过程中MEX3C在颗粒细胞中的表达情况，分组定性MEX3C突变小鼠卵泡发育缺陷，检测IGF-1是否参与MEX3C突变小鼠卵泡发育受损。结果证明：IGF-1注射前，纯合子组体重明显轻于野生型组（P＜0.001），差异有统计学意义，经IGF-1注射后，与纯合子组相比，纯合子+IGF-1处理组体重和卵巢湿重增加，但差异无统计学意义。ELISA结果显示，与纯合子组相比，野生型组和纯合子＋IGF-1处理组血清E2水平显著较高，差异有统计学意义（P＜0.01）。HE染色结果显示，纯合子组卵巢中原始卵泡、初级卵泡、窦前卵泡和窦卵泡减少，闭锁卵泡增加；而纯合子+IGF-1处理组中初级卵泡和次级卵泡数目增多，且闭锁卵泡数目减少。免疫组化结果显示：纯合子组中MEX3C、IGF-1R和p-AKT蛋白表达相对于野生型组是降低的，纯合子IGF-1处理组中IGF-1R和p-AKT蛋白表达相对于纯合子组是升高的。Western blotting结果证实，与纯合子组相比，野生型组MEX3C和IGF-1R蛋白表达量显著较高（P＜0.01），纯合子IGF-1处理组IGF-1R蛋白表达显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：明确MEX3C通过转录后机制调控颗粒细胞IGF-1基因表达，进而影响卵泡的发育，为卵巢储备功能减退患者改善卵巢功能和恢复生育力提供新的科学依据。