miR-7联合miR-17-5P小RNA干扰片段共同阻遏胶质母细胞瘤G1/S转化的研究

细胞周期调节失控是肿瘤细胞无限增殖的核心事件，G1/S转化则为该事件的关键步骤。miR-17-5P通过同步干预多个细胞周期调节蛋白，促进胶质母细胞瘤G1/S转化；.miR-7则通过靶向胶质瘤恶性演变的核心通路EGFR/AKT2成员间接调控肿瘤周期。本课题拟利用人工合成的miR-7片段靶向沉默EGFR/AKT2后间接抑制细胞周期G1启动点调节蛋白复合体CyclinD1/CDK4/6的表达，联合si-miR-17-5P对MAPK通路、G1/S检测点调节蛋白复合体CyclinE/CDK2的靶向沉默作用，共同实现对胶质母细胞瘤EGFR下游双通路（PI3K-AKT通路及Ras-Raf-MEK-Erk-MAPK通路）的联合抑制，并在细胞周期G1启动点和G1/S检测点实现双重抑制效应，使肿瘤细胞在癌基因激活与通路链接、细胞周期调控等多阶段、多步骤中实现综合抑制效应。

研究内容：本课题旨在利用人工合成的 miR-7 片段靶向沉默 EGFR/AKT2 后间接抑制细胞周期 G1 启动点调节蛋白复 合体 CyclinD1/CDK4/6 的表达，联合 si-miR-17-5P 对 MAPK 通路、G1/S 检测点调节蛋白复合 体 CyclinE/CDK2 的靶向沉默作用，共同实现对胶质母细胞瘤 EGFR 下游双通路（PI3K-AKT 通路及 Ras-Raf-MEK-Erk-MAPK 通路）的联合抑制，并在细胞周期 G1 启动点和 G1/S 检测点 实现双重抑制效应，使肿瘤细胞在癌基因激活与通路链接、细胞周期调控等多阶段、多步骤 中实现综合抑制效应。.研究结果：通过研究我们证实接受miR-7和miR-17-5P联合基因转染后胶质瘤U251细胞增殖速度明显减慢，且大部分阻滞于G1期，处于分裂期S期的细胞比例明显减少。与胶质瘤细胞周期相关的P16、P21、CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4和CDK6蛋白表达水平均有明显改变。进一步的机制研究发现miR-7和miR-17-5P联合应用可有效抑制细胞周期G1期调节蛋白复合体CyclinD1/ CDK4/6的活性，并接受P16的协同作用，共同阻遏胶质瘤由G1期向S期转化，进而抑制肿瘤增殖。基于胶质瘤荷瘤鼠皮下模型的体内研究发现miR-7和miR-17-5P联合应用较单独应用肿瘤生长速度更慢，同时出现更多的瘤细胞凋亡。.存在的问题和解决途径：上述联合治疗并不能从根本上彻底阻遏肿瘤复发。因此我们结合近年来有关于胶质瘤干细胞的最新研究动向，分析认为胶质瘤干细胞的存在可能是胶质瘤复发的根本原因，由此我们开展了一些关于胶质瘤干细胞的研究，并以此为基础成功申请到新的科研课题2项。.主要科研成果：该课题按照研究计划提前半年时间完成全部实验内容。目前已发表学术论文7篇，其中SCI收录论文2篇，核心期刊5篇，另1篇英文论文已接收。