柯里拉京对单纯疱疹病毒性脑炎发病过程中TLR2通路的干预作用机制研究

单纯疱疹病毒性脑炎（HSE）治疗手段有限。近期研究发现，TLR2相关的信号通路与HSE发病过程中大量释放的促炎细胞因子和组织损伤关系密切。我们的前期研究显示，柯里拉京的抗炎机制中所抑制的分子与HSE发病过程中导致脑组织损伤的炎症通路有明显的相关性。因此，本课题拟通过柯里拉京干预HSE细胞模型，并在动物体内验证，说明柯里拉京对TLR2信号通路的干预机制。实验以BV-2细胞为模型，采用柯里拉京干预，分别在无病毒感染，给予TLR2特异性刺激，病毒感染三种层面，采用小分子RNA干扰技术，慢病毒载体技术，抑制性ODN等方法干预TLR2以及TLR2相关信号分子，明确柯里拉京对TLR2信号通路的干预机制；并进一步在动物体内证实柯里拉京对TLR2信号通路的干预作用机制。通过此项研究，为明确柯里拉京抗HSE的机制，临床更有效的控制HSE打下基础。

柯里拉京(Corilagin)是叶下珠等植物里面的有效成分之一，我们前期研究显示柯里拉京的抗炎机制中所抑制的分子与HSE发病过程中导致脑组织损伤的炎症通路有明显的相关性。通过本课题进一步研究在单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)发病中柯里拉京的抗炎机制与TLR2信号通路的相关性。本研究通过建立HSE细胞和动物模型研究柯里拉京在HSE发病过程中对TLR2信号通路的干预作用机制。结果显示(1)HSV-1感染BV2细胞后，TLR2及下游信号通路因子表达明显升高，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)柯里拉京治疗受HSV-1感染的BV2细胞后，TLR2及下游信号通路分子表达均下降，与生理盐水治疗组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)TLR2过表达时，柯里拉京治疗受HSV-1感染的BV2细胞后，与生理盐水治疗组比较，TLR2下游信号通路分子表达均下降(P<0.05)。(4)TLR2表达沉默时，柯里拉京治疗受HSV-1感染的BV2细胞后，与生理盐水治疗组比较：TIRAP变化不明显(P>0.05)；MyD88、TRAF6表达上升(P<0.05)；P38、NEMO、NF-кBp65、IL-6、TNF-α表达下降(P<0.05)。(5)柯里拉京治疗受HSV-1感染的小鼠后，与生理盐水治疗组比较，TLR2及下游信号通路分子表达均下降(P<0.05)。结果表明(1)TLR2介导了小胶质细胞对HSV-1感染的先天免疫反应和炎症反应过程。HSV-1感染小胶质细胞后，TLR2信号通路激活，引起TNF-α、IL-6的分泌。(2)柯里拉京可通过抑制TLR2和下游信号因子抑制HSV-1感染后过多的炎性因子，柯里拉京对TIRAP、MyD88、TRAF6的抑制作用需要TLR2的参与，同时柯里拉京可能对NEMO, P38, NF-κB, TNF-α 和IL-6直接有一定抑制作用或者通过其他Toll样受体产生抑制作用。(3)柯里拉京可抑制小鼠脑组织激活的TLR2信号通路，抑制炎性因子的释放。本课题研究结果提示柯里拉京可通过干预单纯疱疹病毒性脑炎中发病中TLR2信号通路减少促炎细胞因子的产生从而减轻炎性损伤，柯里拉京可能有助于改善HSE预后。