用体外亲和力成熟技术提高抗HFRS病毒单链抗体结合活性

本研究用随引物PCR和错配PCR两种方法分别突变抗汉滩病毒（HTNV）核蛋白（NP）鼠源性单克隆抗体（mAb）重链可变区（VH）基因的互补决定区3（CDR3）和全长VH基因，分别构建了库容量均为10（7）左右的噬菌体抗体库。表达并纯化NP编码基因5′端300bp的片段与GST的融合蛋白，生物素化后用于上述噬菌体抗体库的亲和筛选，并筛选出亲和力有所提高的抗体。在此基础上，构建了鼠/人嵌合Fab抗体双特异性抗体表达载体，并在E.coli中表达，鉴定它们免疫学特性，证实表达的双特异性抗体的结和活性优于单链抗体（ScFv）和鼠/人嵌合Fab。还构建了细胞内表达的ScFv真核表达载体，在真核细胞内成功表达，并建立稳定转染的细胞系，正在进一步研究细胞内抗体的功能。