组织工程化人工神经的构建及修复坐骨神经缺损的实验研究

周围神经缺损的修复与重建是当前临床上神经领域的一大难题，而组织工程化神经为解决这一问题带来了希望。周围神经损伤后局部抑制性微环境阻碍了神经的再生，硫酸软骨素蛋白多糖（CSPGs）被认为是主要抑制因素，而软骨素酶ABC（ChABC）能降解CSPGs。本课题拟进行组织工程神经构建的研究。制备ChABC缓释PLGA导管，作为组织工程神经的支架，通过缓释ChABC改善局部抑制性微环境。取大鼠自体脂肪组织，体外分离培养脂肪干细胞，向神经细胞方向进行诱导分化，确定其作为种子细胞的潜能。然后与自体激活雪旺细胞进行联合培养，观察其相容性及生长活性。使两种共培养种子细胞迁移入PLGA导管，构建组织工程化神经，并通过动物实验的方法评价其对于周围神经再生修复的作用。通过研究，以期对临床治疗周围神经缺损提供新的思路和理论依据，为神经缺损的治疗奠定基础。

尽管显微外科技术已取得了很大进步，但周围神经损伤的修复再生在临床上仍是一个常见而又具有挑战的难题。相比自体神经移植，组织工程化神经对修复周围神经损伤是一项很有应用潜力替代治疗。周围神经损伤后局部抑制性微环境阻碍了神经的再生，硫酸软骨素蛋白多糖（CSPGs）被认为是主要抑制因素，而软骨素酶ABC（ChABC）能降解CSPGs。本课题进行了组织工程化神经构建及修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究。制备ChABC缓释PLGA导管作为组织工程神经的支架，并通过缓释ChABC改善局部抑制性微环境。取大鼠自体脂肪组织，体外分离培养脂肪干细胞，向神经细胞方向进行诱导分化，以确定其作为种子细胞的潜能。然后与自体激活雪旺细胞进行联合培养，观察其相容性及生长活性。使两种共培养种子细胞迁移入PLGA导管，构建组织工程化神经。将实验分为4组：自体神经移植组（A组）、PLGA导管联合SCs-ADSCs移植组（B组）、单纯PLGA导管移植组（C组）、单纯损伤组（D组）。分别将三种不同移植物桥接于大鼠坐骨神经10mm缺损处，并在12周后进行大体观察、电生理学检测及形态学分析。术后12周，桥接组都不同程度地实现了坐骨神经缺损再通，且实验动物未出现明显排斥及炎症反应。神经电生理学检测坐骨神经复合肌动作电位波幅结果（未手术正常侧21±1.83mV，A组15±1.12mV，B组13±1.06mV，C组6±0.58mV），透射电子显微镜再生神经纤维髓鞘厚度（A组0.8±0.15μm，B组0.7±0.11μm，C组0.3±0.07μm，D组0.25±0.06μm）。统计结果表明：A组与B组之间无显著统计学意义差异（ANOVA，P>0.05），但两者相对C组及D组都有统计学意义（ANOVA，P<0.05）。通过动物实验我们可以得出，SCs与ADSCs能够在PLGA导管上共同生长分化，且生物相容性良好。PLGA导管联合SCs-ADSCs所构建的组织工程化神经对坐骨神经缺损的修复具有良好的桥接和促神经生长作用。