番荔枝酰胺衍生物FLZ通过抑制炎症治疗帕金森疾病的药理作用以及机制分析

前期实验证明番荔枝酰胺衍生物FLZ对MPTP造成的帕金森动物模型以及细胞模型有明显的保护作用，以及有明显的抗神经炎症的作用。鉴于神经炎症在帕金森疾病发病中的重要作用，我们推测FLZ的神经保护作用可能通过其抗炎作用介导。在本课题中，我们将着重研究FLZ的抗炎作用和机制以及其在神经保护中的作用。我们将采用经典致炎剂脂多糖（LPS）黑质纹状体内注射造成的帕金森大鼠模型，观察FLZ的抗炎作用以及对多巴胺神经元的保护作用。也将采用一系列的大鼠原代中脑神经元/胶质细胞混合培养或神经元及胶质细胞单独培养，对FLZ抗炎作用的机制进行详细探讨，着重研究TLR/MAC1-PI3K-GSK3-NF-κB和TLR/MAC1-MAPK-GSK3-NF-κB这两条重要的炎症信号通路在FLZ抗炎作用中的调控，明确FLZ的治疗靶点。我们的研究将不仅从药效方面，更从机制方面为FLZ开发为抗帕金森新药提供更完善的证据。

过度活化的小胶质细胞介导的神经炎症参与 帕金森氏病(Parkinson’s Disease, PD) 的发病及病理过程。抑制过度活化小胶质细胞介导的神经炎症可保护神经元，具有治疗 PD 的作用。前期研究证实番荔枝酰胺衍生物 FLZ 可抑制过度活化的小胶质细胞，具有很强的神经保护作用，但具体作用机制仍然不十分清楚。本研究旨在应用经典致炎剂脂多糖LPS 建立的体内、外神经炎症 PD 模型，进一步明确 FLZ 抑制神经炎症的作用机制，发现抑制神经炎症的新靶点。体内采用大鼠黑质内定点注射 LPS 作为神经炎症 PD 模型，考察 FLZ 的神经保护和抑制神经炎症作用。结果显示，FLZ 可显著改善 LPS 诱发的 PD 模型大鼠行为学障碍并对黑质内多巴胺能神经元具有较强的保护作用，提高大鼠纹状体内的多巴胺 (Dopamine, DA) 含量并降低 DA 翻转率。FLZ 可显著抑制大鼠黑质内小胶质细胞活化。FLZ 可显著抑制促炎症细胞因子 TNF-α 和 MCP-1 mRNA 的表达。应用 LPS 刺激 BV2 小胶质细胞株作为体外神经炎症模型，考察 FLZ 抑制神经炎症的作用及机制。研究发现，FLZ 可显著抑制 LPS 诱导的 BV2 小胶质细胞活化，如：FLZ 可抑制 Src 酪氨酸激酶介导的炎症信号通路活化，最终抑制核转录因子-κBp65核易位；减少细胞内一氧化氮 (Nitric oxide, NO) 及活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 生成；抑制还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (NADPH) 氧化酶亚单位 p47phox 和 p67phox 膜易位及 NOX-2 表达。敲除 Src 酪氨酸激酶可导致 LPS 诱导的 NADPH 氧化酶和小胶质细胞活化受抑制，同时 FLZ 抑制炎症的作用也随之削弱。以上机制研究表明，Src 酪氨酸激酶在小胶质细胞激活及 FLZ 神经保护过程中发挥重要作用。本研究证实了 FLZ 具有较强的神经保护和抑制神经炎症作用。FLZ 的神经保护作用与其抑制小胶质细胞过度活化及保护黑质部位的多巴胺能神经元密切相关。机制研究表明，Src 酪氨酸激酶是 FLZ 抑制神经炎症的重要靶点。本课题的研究成果已经发表了6篇SCI引用的文章以及1篇中文核心期刊文章，顺利的完成了研究目标。