PLGA/羊毛角蛋白引导组织再生膜的构建及其用于牙周组织再生的研究

The ultimate goal of periodontal therapy is to restore the lost structure and function of the periodontal tissue, including the regeneration of periodontal membrane, cementum and alveolar bone. Therefore, how to regenerate the lost periodontal tissue has already become a key issue in periodontal therapy. However, the technique of guided tissue regeneration (GTR) has had some success. In this treatment technology, GTR membrane is the key factor that directly affects the final restoration results. How to make GTR membrane play its function better is closely related to the type, quality and design of the GTR membrane. In this study, based on the ideas of optimal design and molecular biomimetic design, two-layer poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA)/wool keratin composite membranes and PLGA/wool keratin/hydroxyapatite membranes will be prepared for GTR membrane. Scanning electron microscope (SEM), X-ray diffraction (XRD), Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), energy dispersive spectroscopy (EDS), water contact angle measurement and mechanical testing will be used for characterization. Then, these composite membranes will be used to evaluate the effects in guided tissue regeneration in dog, and clinical index, X-ray film analysis and histological observation and measurement will be used for characterization. The study will serve as a foundation for further study of the PLGA/wool keratin membranes and PLGA/wool keratin/hydroxyapatite membranes for GTR application and the therapy of periodontal disease.

在牙周病治疗中，如何能使丧失的牙周组织再生，是其治疗的难点和关键，而牙周引导组织再生术（GTR）为解决这一难题带来了希望。GTR膜材料是这项技术的关键。如何使GTR膜材料更好地发挥其引导组织再生功能，与膜材料的种类、质量、膜的设计等密切相关。本研究基于申请人对引导组织再生材料的前期基础研究优势，依据材料优化设计以及分子仿生矿化的思路，将聚丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)与羊毛角蛋白复合，制备一种双层结构的PLGA/羊毛角蛋白复合膜和PLGA/羊毛角蛋白/羟基磷灰石复合膜，利用各种检测技术对复合膜的表面形貌、理化性能等进行表征。建立Beagle犬慢性牙周炎动物模型，将制得的复合膜植入牙周骨缺损处，引导牙周组织再生，观察指标采用临床指标、X线片分析及组织学观察和测量等，观察复合膜对牙槽骨和牙周附着组织的再生作用，以期为理想引导组织再生膜的开发以及牙周病的再生治疗提供实验基础和理论依据。

本研究依据材料优化设计以及分子仿生矿化的思路，将聚丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)与羊毛角蛋白复合，制备一种双层结构的PLGA/羊毛角蛋白复合膜，然后将制得的复合膜植入Beagle犬牙周骨缺损处，引导牙周组织再生。研究结果表明,双层结构的PLGA/羊毛角蛋白复合膜外层（浇铸膜层）为致密结构的PLGA/羊毛角蛋白层，内层（电纺膜层）为疏松多孔、具有三维纤维结构的PLGA/羊毛角蛋白层。电纺PLGA/羊毛角蛋白纤维表面光滑、长纤维交织排列，提示羊毛角蛋白被有效的包裹于PLGA/羊毛角蛋白纤维内。在纤维中加入羊毛角蛋白后明显的提高了复合纤维的机械性能。其中，PLGA/1.0 %羊毛角蛋白复合膜显示了最佳的机械性能，其拉伸强度、断裂伸长率和杨氏模量在一系列的复合膜中相对为最优。所有的PLGA/羊毛角蛋白复合膜都具有较高的热学稳定性。体外矿化后，有磷灰石晶体沉积于复合膜表面，显示其具有较高的生物活性。通过对犬的大体观察、牙周指标、GCF量及其中的AST、ALP活性水平检测、CBCT扫描重建、组织形态学观察以及定量分析综合评估了PLGA/羊毛角蛋白复合膜作为GTR膜应用于引导牙周组织再生术的疗效。实验结果表明，12周后，PLGA/羊毛角蛋白复合膜能有效的促进牙槽骨、牙周膜等牙周组织再生，并具有与胶原膜相近的再生效果。因此，本研究表明具有双层结构PLGA/羊毛角蛋白复合膜很可能在组织工程领域有较大的应用潜力，尤其是作为引导组织再生（GBR）膜用于牙周组织再生。本研究为理想引导组织再生膜的开发以及牙周病的再生治疗提供了实验基础和理论依据。