Breg在EV71年龄依赖性致病中的作用及机制研究

手足口病（EV71感染）呈年龄依赖性，但其机制不清。现有证据表明EV71引起了重症病人免疫过激反应，与机体免疫应答失调密切相关。Treg在病毒性感染疾病的免疫调控中起着关键作用，而Treg细胞功能与活性又是受其上层调节细胞Breg所调控，后者与婴幼儿对传染病的易感性相关。因此，本研究拟利用本实验室所建立的EV71年龄依赖性致病小鼠为模型，运用免疫学研究技术，通过对EV71感染后不同时间点的不同日龄乳鼠与成年鼠的Breg、NK、DC、CD4+T、CD8+T、IFN-γ、IL-6、病理切片进行比较分析，探索造成EV71感染年龄依赖性的细胞与分子机制，并最后在动物模型和细胞模型上进行功能验证，旨在阐明Breg在EV71年龄依赖性致病中的作用及机制。本研究将为婴幼儿手足口病的防治奠定一定的理论基础和提供潜在免疫干预靶标，而且将部分揭示免疫调控影响传染性疾病易感性的本质原因。

近年来，EV71型手足口病在亚太地区呈现爆发流行态势，由于迄今仍没有安全、有效的疫苗和高效、低毒的药物来防治手足口病，手足口病的爆发流行短期内无法得到有效扼制。对于疫苗研发和药物研制至关重要的手足口病病原、免疫、致病机制基础研究仍然薄弱，大部份仍属空白，亟待加强。.本课题立足国内手足口病流行病学实际，站在国内外抗感染免疫前沿，探讨手足口病免疫致病机制的根本问题，获得了手足口病临床病人和动物模型的完整资料，找到了致病的关键的免疫细胞和分子，得到了潜在的免疫干预靶标，取得了实质性的进展，较为圆满地完成了课题的预期目标和任务。.利用病毒学、分子生物学方法从手足口病患儿临床样品中分离获得了大量的EV71和柯萨奇病毒A16（CA16）毒株，为疫苗株筛选和动物模型建立提供了丰富的物质材料；.利用病毒驯化原理，将对乳鼠致病力低的毒株通过鼠源细胞、低日龄乳鼠逐步驯化，成功获得对乳鼠高致病的毒株，成功感染致死14日龄乳鼠并获得了嗜肌肉型、嗜神经型的毒株，为动物模型的建立提供了坚实的基础；.利用所分离驯化的毒株攻击不同日龄乳鼠，通过观察死亡率、临床疾病得分、体重变化，成功建立手足口病动物模型；.在建立的手足口病动物模型上，利用流式细胞术分析了Breg、Treg、NK、DC、T、B等免疫细胞的变化规律；利用CBA技术分析了IL-6、TNF-α、CCLx、CSF等炎症相关免疫、趋化、生长因子的变化规律；利用ELISA手段分析了去甲肾上腺素和皮质醇等内分泌激素的变化规律；利用病理学方法分析了不同组织器官的病理变化规律；.利用以上技术和方法，对手足口病患儿临床样品，尤其是血清、血浆、脑脊液样本分析了IL-6、TNF-α、CCLx、CSF等炎症相关免疫、趋化、生长因子的变化规律；对血细胞分析了Breg、Treg等免疫细胞的变化规律；并对手足口病重症患儿病例的脑脊液涂片和血细胞流式细胞术结果进行了统计学分析；通过比较分析，找到了动物模型和临床样本变化规律一致的免疫细胞和分子；为进一步进行转化医学研究奠定了基础；.对动物模型和临床样本变化规律一致的免疫细胞和分子在动物模型上进行了免疫干预研究，并在基因敲除小鼠上进行了功能验证，获得了手足口病免疫致病关键的免疫细胞和分子，正在进行免疫信号级联通路机制研究，真正阐明免疫致病的细胞和分子机制，提供多个潜在的免疫干预靶标.