整合素 β4 基因条件性剔除构建小鼠哮喘易感性模型

本组前项研究发现整合素β4 基因在哮喘病人气道上皮表达明显下调，诱导气道上皮细胞抗氧化能力损伤、损伤修复速度减慢、气道周围Th1淋巴细胞分化抑制。提示整合素 β4表达缺陷可能与哮喘易感性相关。为证实这种相关性，确定一种新的哮喘易感基因和分子标记，本课题拟采用条件性基因打靶等研究策略，获得由多西环素诱导的组织定位于气道上皮的整合素 β4基因条件性剔除小鼠模型。肺泡表面蛋白表达、肺组织病理及超微结构等检测观察整合素 β4基因剔除对新生鼠肺发育的影响；上皮细胞增殖分化及凋亡指数、损伤修复速度、抗氧化能力及抗原呈递能力等检测观察整合素 β4基因剔除对气道上皮细胞功能稳态的影响；气道阻力、炎性细胞浸润及分类、淋巴细胞增殖及分化等检测观察整合素 β4基因条件性剔除小鼠的哮喘易感性。本课题从上皮细胞粘附与损伤应激等角度为哮喘发病机制研究提供新的思路和线索，具有理论创新和应用潜力。

在本课题前期研究中发现integrin β4基因在哮喘病人气道上皮表达明显下调，诱导气道上皮细胞抗氧化能力损伤、损伤修复速度减慢、气道周围Th1 淋巴细胞分化抑制。提示integrin β4 表达缺陷可能与哮喘发病密切相关。为证实这种相关性，本课题采用条件性基因打靶等研究策略，构建由多西环素诱导的组织定位于气道上皮的integrin β4 条件性基因剔除小鼠模型，进而验证integrin β4 表达缺陷与哮喘发病的相关性。本项目研究完成情况如下：①已成功构建以integrin β4 为目的基因的floxed integrin β4杂合子小鼠；②成功引进并净化CCSP-rtTAline 和 (otet)-Cre line 两种工具小鼠；③完成CCSP-C-rtTAline 和 (otet)-Cre line 两种小鼠杂交，建立Cre-CCSP-(otet)双转基因小鼠；④实现Cre-CCSP-(otet)小鼠与integrin β4 floxed 小鼠杂交，建立三重杂交Cre-CCSP-(otet)-integrin β4 floxed小鼠，实现多西环素诱导的定位于气道上皮的条件性基因打靶效应。⑤本课题正在进一步检测Cre-CCSP-(otet)-integrin β4 floxed 三重杂交小鼠的哮喘易感性，证实integrin β4 表达缺陷与哮喘发病的直接相关性。