猪细小病毒病毒样颗粒表位展示载体的分子设计

本项目基于对PPV VLPs T细胞表位载体的研究基础，综合运用生物信息学和分子生物学等技术，分别缺失PPV VP2 肽链loop1～4内相应基因，再用腺病毒表达系统表达，研究缺失突变株表达病毒样颗粒的情况；进一步以O型口蹄疫病毒(FMDV)为示范，研究PPV VP2容纳外源抗原决定簇的能力，即，将FMDV B细胞表位基因(141～160表位肽)替换缺失突变株相应缺失基因，通过表达产物的透射电镜观察，寻找VP2肽链中适合PPV VLPs有效形成并产生针对FMDV免疫应答的B细胞表位基因插入位点，并探讨该类位点的特征；深化对PPV VP2基因组结构与功能的认识，构建PPV VLPs 为平台的 B、T细胞抗原表位载体，不但能激发体液免疫，而且可以激发细胞和粘膜免疫，具有安全、高效的特点，是很有发展前景的表位展示载体。

本项目综合运用生物信息学和分子生物学等技术，构建了PPV VP2 肽链loop1～4基因缺失株，研究缺失突变株VP2表达及病毒样颗粒（VLPs）组装情况，结果表明，loop2，loop4基因缺失株VP2能组装成VLPs，以将绿色荧光蛋白（GFP） 作为报告基因，分别插入Loop2和Loop4，进一步验证了上述结论；以口蹄疫病毒（FMDV）为示范，即，模拟PPV VP2蛋白表面loop2，loop4区插入FMDV VP1蛋白T/B细胞表位基因[（21-40Aa）、（141～160Aa）、（200-213Aa）]空间构象，并在VP2 N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE)，人工合成嵌合基因并克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTA中，用脂质体法转染Sf9细胞。对重组病毒rBac-FMDVVP1 PPV VP2感染的Sf9细胞，用间接免疫荧光试验(IFA)检测，具有特异性荧光；用Western-blotting分析，64 000处出现一条特异蛋白条带；电镜观察，重组VP2蛋白能够自主组装成病毒样颗粒。免疫效应实验结果表明，重组病毒免疫组小鼠FMDV 特异性体液免疫和淋巴增殖均高于口蹄疫合成肽疫苗免疫组。 本项目确定了VP2肽链中适合PPV VLPs有效形成并产生特异性免疫应答的T/B细胞表位基因插入位点；构建了PPV VLPs 为平台的 B、T细胞表位载体，不但能激发体液免疫，而且可以激发细胞免疫，具有安全、高效的特点，为发展同时抗一个或多个病原的疫苗开辟了新的思路。. 申请国家发明专利一项并获得授权；发表SCI论文1篇，另1篇审稿中；发表国内核心期刊论文1篇；培养研究生2名。