基于代谢组学技术的消癌解毒方抗癌机理研究

消癌解毒方是在国医大师周仲瑛教授癌毒创新理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方。前期研究证实了癌毒在肿瘤临床证候中的客观存在及该方的显著疗效，该方抗癌作用是多成分、多层次、多靶点综合调节的结果，具有较高的研究价值及应用前景。.项目以前期研究为基础，遵循中医药学自身特点和规律，以代谢终点表型小分子为对象, 利用代谢组学技术检测肿瘤模型不同时间及给药前后体内代谢物变化，建立代谢组指纹图谱,挖掘谱间隐含信息,发现与癌毒密切相关的特定代谢组分,寻找癌毒生物标志物，监测代谢网络在消癌解毒方干预下变化过程,发现与该方作用相关的代谢途径及靶点，揭示其在代谢调控中多靶点多层次整合作用特点、发挥作用的"关联"成分(群)等，从系统和整体水平解读该方抗癌机理，从代谢调控网络探讨癌毒本质，诠释癌毒理论科学内涵，开创中药复方抗癌机理研究新途径，为中医药复杂理论体系的系统研究提供重要的新思路。

项目采用Walker-256荷瘤大鼠模型，随机分组；利用代谢组学技术，建立代谢组指纹图谱，检测血清及尿液代谢组学变化，找出并分析差异化合物，分析药物效应；并开展化学成分研究及药效物质基础研究，建立化学成分数据库。..一、消癌解毒方对Walker-256荷瘤大鼠抑瘤、生存期及免疫的影响研究.ELISA检测外周血肿瘤坏死因子（TNF-α）、转化生长因子-β(TGF-β)、细胞金属蛋白酶2（MMP2）、血管内皮细胞生长因子(VEGF)。该方显著降低荷瘤大鼠血清中TNF-α和TGF-β含量。该方抑制肿瘤生长、延长大鼠生存期的作用可能与免疫调节作用有关。..二、消癌解毒方对Walker-256荷瘤大鼠血清及尿液代谢组学的影响.以GC/TOF-MS为技术平台，建立大鼠血清代谢指纹谱。模型组中氨基酸、糖及脂代谢均出现异常，氨基酸利用、尿素循环和糖代谢受干扰最严重。造模第1天，模型组与正常对照相比，15个差异化合物，鉴定出12个；造模第11天，30个化合物发生了显著变化，鉴定出15个。5个化合物在两个时间点下均发生显著变化，鉴定出3个，这3个化合物可能是潜在的生物标记物。消癌解毒方对氨基酸及糖代谢有调节作用。该方治疗11天后，与模型组比较，治疗组血清代谢物浓度具有明显差异的有7种物质。高剂量组的代谢调节作用最明显。高剂量组在给药11天后，血清代谢谱明显偏离模型组而呈现向正常转归趋势，对模型组中发生异常变化的30个代谢物中6个产生调节作用，鉴定出3个。.采用液-质联用法测定各组尿液代谢组学变化。结果模型组的尿液代谢远远偏离正常，尿液中82种代谢物发生显著变化，鉴定出44种。消癌解毒方各剂量组均有代谢调节作用，呈剂量依赖性；高剂量组治疗11天发挥较好代谢转归作用，可部分将造模引起的代谢改变逐渐向正常调节。..三、消癌解毒方及复方中单味药的化学成分研究 .研究白花蛇舌草、八月札、麦冬等单味药的化学成分，并对消癌解毒方的水提液和醇提液进行分析。..四、消癌解毒方化学成分数据库的建立.根据质谱裂解规律，建立化学成分数据库。..五、消癌解毒方药效物质基础研究 .采用系统溶剂法把消癌解毒方分成石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇部位，采用Walker-256大鼠模型，筛选出二氯甲烷和正丁醇部位为抗肿瘤有效部位；采用液质联用技术研究各有效部位化学成分，初步阐明该方抗肿瘤的药效物质基础。