胀亡－ 脑缺血后星形胶质细胞主要死亡途径和机制探讨

本研究在课题负责人改良的大鼠局灶脑缺血再灌注模型的基础上，结合原代培养星形胶质细胞缺糖缺氧模型，对前期工作中证实的脑缺血不同时间星形胶质细胞胀亡进行动态和定量研究，并对引起胀亡可能的膜损伤机制进行探讨。首先应用免疫荧光双标染色法探讨脑缺血后星型胶质细胞胀亡过程中钠钾氯共转运蛋白 、水通道蛋白4 、钠-钾-ATP酶表达的时空分布特点；应用电镜对不同时间缺血的在体或离体肿胀星形胶质细胞核直径和染色质稀疏度进行观察，定量测定细胞胀亡的程度；同时应用流式细胞仪检测缺糖缺氧后原代培养星形胶质细胞凋亡和胀亡的比例；应用Western blotting和分光光度法离体检测缺糖缺氧后星形胶质细胞钠-钾-ATP酶活性变化、钠钾氯共转运蛋白及水通道蛋白4含量变化；并探讨上述离子通道及水通道的抑制剂与激活剂对在体与离体缺血或缺糖缺氧后星形胶质细胞胀亡的影响。