低剂量砷去甲基化作用上调肺上皮细胞NF-kB2表达的分子机制研究

无机砷是明确的环境致癌物，所致肺癌是一种职业病，其致癌机制仍不清楚。前期我们报道低剂量砷暴露能上调NF-kB2转录表达，促使正常肺上皮细胞异常增殖，提示NF-kB2可能是砷致癌机制的重要分子。结合预实验中砷致NF-kB2启动子去甲基化作用和文献中转录因子STAT1、NF-kB和Miz1调控NF-kB2的报道，我们推测砷可能通过调控启动子CpG岛的去甲基化，促进转录因子与启动子的结合而上调NF-kB2基因的表达。本研究拟采取ChIP、荧光素酶报告基因、siRNA等方法，通过分析低剂量砷暴露前后肺正常上皮细胞株中NF-KB2启动子CpG岛甲基化模式对转录因子STAT1、NF-KB和Miz-1与NF-kB2结合能力的影响，研究在低剂量砷导致的肺上皮细胞恶性增殖中，NF-kB2这一重要信号分子转录增加的机制。结果将为NF-KB这一重要信号通路的转录调控研究提供新的线索，有利于深入认识砷的致癌机制。

低剂量无机砷是明确的环境致癌物，其致癌机制仍不清楚。我们发现低剂量砷暴露能上调NF-kB2转录表达，进而引起cyclin D1的表达增强，最终促使正常肺上皮细胞异常增殖，提示NF-kB2可能是砷致癌机制的关键始动分子之一。但砷通过何种机制促进nfkb2的表达并不清楚。Nfkb2这一重要分子的表达调控受到哪些因素的影响也尚未明确。已有研究表明低剂量砷能使基因组去甲基化，而NFkb2基因区域存在多个甲基化位点。我们推测砷可能通过调控CpG岛的甲基化，促进转录因子与启动子的结合而上调NF-kB2基因的表达。本研究中我们采取BSP测序、ChIP、荧光素酶报告基因、siRNA等方法，发现低剂量砷暴露前后肺正常上皮细胞株与多种肺癌细胞中NF-KB2启动子CpG岛均处于非甲基化状态，鉴定发现nfkb2基因内含子区域存在一未报道的关键调控序列，并且受到甲基化影响；ChIP实验表明与这一关键顺式调控元件相互作用的转录因子可能是c-myc。我们的结果表明cmyc可以调控nfkb2的表达，nfkb2可能是cmyc这一重要原癌基因的靶基因，cmyc发挥的促癌效应可能与nfkb2有关，砷可能通过c-myc影响nfkb2的表达，进而影响肺上皮细胞的恶性转化。此外，我们也发现低剂量砷处理后，可以促进miR-200c、661、92等多个miRNA的表达，这些miRNA有些已被证实为重要的肿瘤相关miRNA，有些则功能研究较少，其在砷导致肺癌过程中的作用及其本身的异常表达机制均值得深入研究，为下一步深入研究砷对肺上皮细胞恶性转化的机制提供新的线索。