β-arrestin-1在盐酸戊乙奎醚降低脓毒症肺微血管通透性中的作用研究

β-arrestin-1与p38 MAPK信号通路密切相关，激活的p38 MAPK通过改变肌动蛋白骨架的结构和功能，从而调节微血管通透性。盐酸戊乙奎醚是一种毒蕈碱型抗胆碱药物，本课题拟通过观察β-arrestin-1基因缺失小鼠诱发脓毒症急性肺损伤后盐酸戊乙奎醚对肺微血管通透性的影响，探讨盐酸戊乙奎醚对通透性的调节作用是否与上调β-arrestin-1有关；并构建毒蕈碱受体 siRNA表达载体转染小鼠肺微血管内皮细胞，探讨盐酸戊乙奎醚上调β-arrestin-1的作用是否与毒蕈碱受体有关。通过分析β-arrestin-1在盐酸戊乙奎醚降低脓毒症肺微血管通透性中的作用，为深入探讨盐酸戊乙奎醚的临床应用提供理论依据。

背景：β抑制蛋白(β-arrestins)是G蛋白偶联受体通路的负调控蛋白，有研究发现其在维持内皮细胞通透性中具有重要作用。本研究拟通过β-arrestin-1 shRNA干扰转染人肺微血管内皮细胞，利用LPS与细胞共同孵育建立体外脓毒症模型，探讨盐酸戊乙奎醚对通透性的调节作用是否与上调β-arrestin-1有关，并观察这种作用是否依赖于毒蕈碱受体的存在。. 方法：（1）建立脓毒症小鼠模型，检测肺通透指数、β-arrestin-1蛋白和mRNA表达及p38MAPK激活程度，观察盐酸戊乙奎醚对小鼠肺微血管通透性的影响。（2）利用RNA干扰技术建立β-arrestin-1基因干扰的人肺微血管内皮细胞（HPMVEC），通过空质粒转染的HPMVEC与β-arrestin-1基因 shRNA干扰的HPMVEC比较，探讨盐酸戊乙奎醚调节肺微血管通透性的作用是否与上调β-arrestin-1有关。（3）通过正常HPMVEC与M3基因shRNA干扰的HPMVEC比较，探讨盐酸戊乙奎醚上调β-arrestin-1的作用是否与毒蕈碱受体M3有关。观察肌动蛋白骨架变化，检测F-actin表达、肺微血管通透性、Hsp27蛋白、β-arrestin-1蛋白及mRNA和p38MAPK磷酸化蛋白表达。. 结果：（1）与正常组小鼠比较，脓毒症小鼠肺通透指数、肺组织p38MAPK激活程度升高，β-arrestin-1蛋白和mRNA表达水平降低；盐酸戊乙奎醚可以降低脓毒症小鼠的肺通透指数、肺组织p38MAPK激活程度，提高β-arrestin-1蛋白和mRNA表达水平。（2）β-arrestin-1基因 shRNA干扰的HPMVEC与空质粒转染的HPMVEC相比较，盐酸戊乙奎醚抑制p38MAPK激活及降低Hsp27蛋白表达的作用均减弱，降低微血管通透性及改善细胞骨架蛋白排列的作用减轻。（3）M3基因shRNA干扰的HPMVEC与正常HPMVEC相比较，盐酸戊乙奎醚上调β-arrestin-1的作用无显著差异。. 结论：盐酸戊乙奎醚可通过上调β-arrestin-1的表达，降低p38MAPK激活，从而降低肺微血管通透性，减轻脓毒症小鼠肺损伤。盐酸戊乙奎醚改善肺微血管通透性的作用依赖于β-arrestin-1的存在，但盐酸戊乙奎醚上调β-arrestin-1的作用与毒蕈碱受体M3的存在无必然联系。