绵羊肺炎支原体Y98主要外膜抗原蛋白筛选与功能鉴定

绵羊传染性胸膜肺炎是由绵羊肺炎支原体引起的一种慢性呼吸道疾病，由于绵羊肺炎支原体结构复杂、培养困难，目前仍缺乏有效的诊断和防治措施，给养羊业造成了严重的经济损失。本课题在对绵羊肺炎支原体外膜抗原蛋白鉴定的基础上，首先通过双向电泳（2-DE）和Western blot进一步筛选和纯化绵羊肺炎支原体标准株Y98的主要外膜抗原蛋白P26和P40；然后应用串联质谱和N端测序方法获得P26和P40的N端氨基酸序列和部分肽段的氨基酸序列信息，根据蛋白氨基酸序列逆推其编码读框，设计简并引物，通过RT-PCR和3′RACE得到P26和P40的编码全长cDNA，克隆其基因，分别构建表达抗原蛋白P26和P40的重组菌株并进行表达产物的鉴定；最后对表达的外膜抗原蛋白分别进行生物学特性分析，研究其免疫原性，为进一步阐明绵羊肺炎支原体的致病机理和免疫机制以及研制其基因工程疫苗和促进本病诊断技术的发展奠定奠础。