搭载IL-12和反义VEGF165的腺病毒与放疗联合治疗肿瘤研究

Radiation therapy effects for tumor of large burden or multiple metastatic tumor is poor or no presently, and sometime can increase the tumor metastasis.In order to achieve a better therapeutic effect, the radiation therapy need to company with chemotherapy, biotherapy, target therapy.The key of gene therapy is how to arrange the exogenous genes into target cells and express stably. The adenovirus is considered highly expressed gene transfer vector presently.We produced tumor specific replicable adenovirus vector that expression of interleukin -12 and antisense vascular endothelial growth factor 165, through their respective function can kill tumor cells directly, and can increase the tumor specific immune response, also can inhibition of tumor angiogenesis. In this study we assume through the synergy between them, that the radiotherapy and tumor cell specific killing adenovirus kill the tumor cells directly; and that the combined treatment of IL-12 and antisense VEGF165, increased tumor specific immune response and inhibition of tumor angiogenesis, and get better therapeutic effect on the patients with large burden tumor or multiple metastatic tumors who can’t receive operation and chemotherapy, finally achieve long- term survival purposes.

目前为止,放射治疗针对大肿瘤和多处转移的肿瘤效果很差或者根本无法治疗，有时可增加肿瘤转移，所以放射治疗还需要与化疗、生物治疗、靶向治疗等联合运用，以达到更好的治疗效果。生物治疗中腺病毒治疗的最关键的环节就是如何有效地将外源基因导入靶细胞内并使其稳定表达。腺病毒载体被认为是高效表达的基因转移载体。我们已经制作的肿瘤特异性可复制腺病毒载体上搭载可表达白介素-12（IL-12）和反义血管内皮生长因子165（反义VEGF165），通过它们各自的功能特性要达到直接杀伤肿瘤细胞,增加肿瘤特异性免疫反应,抑制肿瘤血管生长的作用。在此项研究中我们假设:通过放疗和肿瘤细胞特异杀伤性腺病毒直接杀伤肿瘤细胞； 同时又结合IL-12和反义VEGF165的联合治疗，通过它们之间的协同性，增加肿瘤特异免疫反应和抑制肿瘤血管生长，在不能接受手术和化疗的大肿瘤和多处转移的肿瘤中做到更好的治疗效果，最终达到长期生存目的。

目的：转移相关的肺腺癌转录本1(MALAT1)是一种长链非编码RNA。已被证实，在骨髓瘤细胞中通过与 PARP1和 LIG3结合而参与其他非同源性末端接合(A-NHEJ)通路。本研究旨在探讨 MALAT1在非小细胞肺癌(NSCLC) DNA 修复过程中的作用。方法：采用免疫共沉淀法和 RNA下拉法鉴定 MALAT1与蛋白质的相互作用。用生物信息学工具预测了 MALAT1与 microRNA(miRNA)之间的相互作用，并用荧光素酶分析和 RNA 下拉法进行证实。DNA 损伤用彗星实验进行了定量，MTT 法检测细胞活性，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：发现 MALAT1参与了非小细胞肺癌细胞的 A-NHEJ 通路。然而，在 A-NHEJ 通路失活的 LIG3-null 细胞中，靶向 MALAT1仍会增加 DNA损伤，表明 MALAT1参与了其他 DNA 修复途径。随后，MALAT1被鉴定为与 miR-146a 和 miR-216b 结合，后者直接作用于 BRCA1的3′ UTR。结果证实 MALAT1在 NSCLC 细胞中具有竞争性内源性 RNA (ceRNA)的功能，吸收 miR-146a 和 miR-216b，上调 BRCA1的表达，保护同源重组信号通路。最后，过度表达的 MALAT1基因保护 NSCLC 细胞免受顺铂的细胞毒作用。而靶向 MALTA1则通过抑制 HR 通路引起 DNA 损伤，使 NSCLC 细胞对有可能治疗 NSCLC 的顺铂具有敏感性。结论：MALAT1通过保护 BRCA1参与 HR 通路，靶向 MALAT1可诱导 NSCLC DNA 损伤。