安神定志灵调控ADHD多巴胺突触囊泡循环的机制研究

The theory of dopamine deficiency has been the current focus of researches on the pathogenesis of ADHD. Recently, studies have revealed that the abnormal formation and dysfunction of SNARE complex during dopamine synaptic vesicle cycle are closely related to dopamine deficiency and the pathogenesis of ADHD. Meanwhile, BDNF/TrkB signaling pathway can affect the synaptic vesicle circulation by regulating the formation of SNARE complex. It has gradually become a hot spot in the study of dopamine deficiency theory. Our previous studies have shown that Anshen Dingzhi Ling can regulate the expression of BDNF, SNAP25 and Synataxin1a and improve the core symptoms of ADHD. SNAP25 and Synataxin1a are two key proteins to assemble SNARE complex. Therefore, we propose that Anshen Dingzhi Ling may play an potential role in regulating dopamine synaptic vesicle cycle. To validate the hypothesis, we intend to explore the molecular mechanism by which Anshen Dingzhi Ling affects the formation of SNARE complex through BDNF/TrkB signaling pathway, and investigate the effects of Anshen Dingzhi Ling on the function of SNARE complex by measuring expression levels of regulatory factors participated in dopamine vesicles transport, anchoring, membrane fusion and exocytosis in synaptosomes. By means of this study, we will elucidate the mechanisms through which Anshen Dingzhi Ling regulates dopamine synaptic vesicle cycle. This study will further clarify the potential therapeutic target of Anshen Dingzhi Ling and provide experimental evidence for the researches on the pathogenesis of ADHD.

多巴胺缺陷理论是当前研究ADHD发病机制的热点。近期研究发现，多巴胺突触囊泡循环过程中SNARE复合体的形成及功能异常与多巴胺缺陷及ADHD的发病密切相关，而BDNF/TrkB信号通路能通过调控SNARE复合体影响突触囊泡循环，正成为研究多巴胺缺陷理论的新热点。我们前期研究显示，安神定志灵能调控BDNF以及构成SNARE复合体的SNAP25、Synataxin1a表达，改善ADHD核心症状。据此，我们提出安神定志灵可能通过调控多巴胺突触囊泡循环发挥效应。为验证此假设，我们将通过对BDNF/TrkB信号通路的研究，探索安神定志灵调控SNARE复合体形成的机制；通过对突触体内多巴胺囊泡转运、锚定、膜融合及胞吐各环节调节因子的检测，探讨安神定志灵对SNARE复合体功能的影响，阐明安神定志灵调控多巴胺突触囊泡循环的作用机理，为进一步明确安神定志灵的作用靶点及ADHD的发病机制研究提供实验依据。

注意缺陷多动障碍（ADHD）是儿童期常见的神经发育障碍性疾病。国内外研究发现，多巴胺突触囊泡循环过程中SNARE复合体的形成及功能异常与多巴胺缺陷及ADHD的发病密切相关，而BDNF/TrkB信号通路能通过调控SNARE复合体影响突触囊泡循环，是研究多巴胺缺陷理论的新热点。我们前期研究显示，安神定志灵能调控BDNF以及构成SNARE复合体的SNAP25、Synataxin1a表达，改善ADHD核心症状。为进一步明确安神定志灵调控ADHD多巴胺突触囊泡循环的效应及机制，我们进行动物实验，运用动物行为学和多种分子生物学实验方法进行了深入研究。通过研究我们发现：1.安神定志灵可以激活前额叶、纹状体和海马突触体中的BDNF/TrkB信号通路，而MPH和7,8-DHF也可以激活前额叶和海马突触体中的BDNF/TrkB信号通路，从而促进形成SNARE复合物；安神定志灵可以激活前额叶和海马突触体中的BDNF/P75/JNK1/NF-κB信号通路。我们的发现表明安神定志灵通过激活前额叶和海马突触体中的BDNF/TRKB信号通路来促进突触囊泡中DA的释放，并激活BDNF/P75/JNK1/NF-κB信号通路来抑制突触囊泡释放DA，调节突触间隙中DA浓度达到稳态，达到改善ADHD核心症状的目的。2.安神定志灵通过上调前额叶皮质、纹状体和海马突触体中Rab3A蛋白表达水平，降低前额叶皮质、纹状体中Munc 18蛋白表达水平，升高海马中NSF及α-SNAP蛋白表达水平，对纹状体和海马突触体中Synaptotagmin1、Synaptophsin、CAPS1蛋白表达水平有升高趋势，从而增加DA囊泡膜融合胞吐外排，提高突触间隙DA水平，改善ADHD的核心症状。这些研究初步揭示了安神定志灵对ADHD多巴胺突触囊泡循环的效应及机制，补充了多巴胺缺陷理论。本研究为后续中医药对ADHD发病机制的研究奠定了基础，为中医药治疗ADHD提供了更多理论依据。