电针足三里穴通过调控下丘脑miR-155治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用机制研究

Acupuncture, which can treat many diseases, is one of the oldest effective treatments. Multiple sclerosis (MS), which is mainly of T cell unbalance, has a high disability rate and no radical treatment. Acupuncture is widely used in clinic because of its safety and less side effects, but in the face of the mainstream medicine, it is the main challenge that there is no scientific acceptable treatment mechanism. Present mechanisms of acupuncture are all at the level of cells or proteins, for the regulatory mechanisms of acupuncture on gene has not investigated yet. Our previous work showed that electroacupuncture can inhibit the expression of miR-155 in hypothalamus, promote production of hypothalamic corticotropin releasing hormone, T cell subsets imbalance correction and treatment of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) - MS animal model. Our scientific hypothesis proposed is the effect of acupuncture on the production of miR-155 in the hypothalamus, and then regulate protein synthesis, to correct the imbalance of cell subtype, so as to achieve the effect of treatment of the disease. This subject on the basis of the preliminary work, for the first time at the genetic level to investigate mechanisms of acupuncture, put forward the new theory, not only enrich electroacupuncture treatment of theoretical content EAE/MS mechanism, more in acupuncture treatment of clinical disease provide new scientific basis.

针灸是我国传统有效治疗方法之一，在治疗某些疑难疾病中发挥着重要作用。T细胞介导的多发性硬化(MS)在西医无特效治疗手段的情况下，针灸作为药物疗法的补充手段发挥其独特的治疗作用。但针灸受到的最主要挑战是没有科学的可接受的治疗机制，已有的针灸作用机制都停留在细胞或蛋白水平，在基因水平上的作用至今无人探讨。我们前期工作发现：通过电针足三里治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)-MS动物模型，能明显调控EAE动物下丘脑miR-155的表达，同时促进下丘脑促肾上腺皮质素释放激素(CRH)产生。本课题提出的科学假说是：电针治疗EAE/MS后调控下丘脑miR-155的表达，进而促进CRH的产生，激活HPA轴，纠正细胞亚型失衡，从而达到对疾病的治疗效果。我们首次在基因水平探讨针灸作用机制，这一新理论的提出，不仅丰富电针治疗EAE/MS机制理论内容，更为今后针灸治疗临床疾病提供新的科学依据。

多发性硬化是以T细胞介导的中枢神经系统炎性浸润导致脱髓鞘病变为特点的自身免疫性疾病。目前全球针对多发性硬化的治疗方案仍没有治愈措施，针灸学作为祖国传统医学的重要组成部分，具有很好的辅助治疗多发性硬化的效果，但其治疗作用机制目前尚不清楚。本课题以多发性硬化的理想动物实验模型—实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）小鼠为研究对象，通过对EAE小鼠进行电针足三里穴治疗，探讨电针对EAE的治疗效果；通过流式细胞技术及Q-PCR技术观察电针对CD4+ T细胞亚型的影响；通过Q-PCR及免疫荧光技术探讨电针对中枢神经系统内前阿黑皮素原（proopiomelanocortin，POMC）的影响；通过Q-PCR技术检测电针对中枢神经系统内mir-155的影响；通过体内体外模型深入探索mir-155与POMC的关系。发现电针有效的延迟EAE的起病时间，缓解EAE发病的严重程度，并且减少炎性细胞浸润至中枢神经系统，改善脊髓脱髓鞘病变的发生。电针可以有效的减少Th1,Th17促炎细胞的比例，增加Th2细胞的比例。明确电针促进中枢神经系统内POMC的表达以及抑制mir-155的表达。体外培养神经元验证mir-155能够抑制POMC的表达。注射mir-155 mimic可以降低电针对EAE模型的治疗效果。电针可以有效治疗缓解EAE小鼠发病的严重程度；电针可以纠正CD4+ T细胞亚型的失衡；电针能够上调中枢神经系统内POMC以及抑制mir-155的表达，并且体外证实，mir-155与POMC呈负性相关；电针治疗EAE模型的靶点是mir-155。通过此项研究，不仅为针灸学治疗疾病提供了科学依据，明确并丰富了针灸治疗多发性硬化的效果及作用机制，为针灸在临床治疗多发性硬化提供了重要的理论依据。同时将现代医学与针灸学相结合，有效的大力弘扬祖国传统医学。