低氧诱导因子－1α（HIF-1α）靶向抗肺微血管内皮细胞增殖治疗在肺动脉高压中的作用

肺血管内皮功能障碍是肺血管病变重要的发病机制。血流冲击、药物、缺氧、基因突变等因素最早引起肺血管内皮细胞凋亡，进而对"凋亡抵抗内皮细胞"发生选择。此类内皮细胞表型改变、凋亡下降、增殖旺盛，导致血管丛集样改变。研究发现肺组织内各部位中凋亡和高增殖特征的内皮细胞常常并存，所以要针对特定表型的内皮细胞进行靶向治疗。本研究目标 1．证实肺血管丛状病变区域低氧诱导因子（HIF）选择性高表达。2.构建包含低氧敏感序列（HRE）启动子，针对血管内皮生长因子受体（VEGFR-2）siRNA序列的腺病毒表达载体，验证在不同氧浓度下目的基因干扰。2. 在体实验中，首先通过静脉注射Fab-9B9抗体，促进腺病毒和肺血管内皮表面结合，提高腺病毒感染效率；其次静脉注射构建的腺病毒载体，以HIF蛋白为靶向，选择性促肺血管内皮细胞凋亡，通过观察肺血管病理、内皮凋亡分布、丛集样病变改善验证其疗效，为逆转血管重构提供思路。

我们通过左肺切除联合野百合碱皮下注射建立大鼠肺动脉高压，观察大鼠肺小动脉内膜增殖部位缺氧诱导因子（HIF-1α）、己糖激酶-2等蛋白表达。观察了二氯乙酸盐对内膜增殖的治疗作用。我们的研究发现早期二氯乙酸盐干预能缓解新生内膜的形成，与诱导超氧化物歧化酶活性增加，促进活性氧降解，抑制HIF-1α表达有关。但是晚期干预却没有疗效。其中的原因之一: 晚期肺血管重构部位，肺小血管管腔狭窄甚至闭塞，降低了二氯乙酸盐转运到靶目标部位（损伤部位）效率。我们的体外实验进一步证实，二氯乙酸盐对肺血管平滑肌细胞抗增殖作用可能与抑制GSK-3β/AKT通路有关。我们联合小剂量PI3K阻断剂（2μM LY294002）与二氯乙酸盐观察对平滑肌细胞的抗增殖作用。结果证实：LY294002 呈剂量依赖性协同二氯乙酸盐的作用。可能的机制与抑制己糖激酶-2表达和线粒体转位，促进线粒体膜电势去极化，加强细胞凋亡有关。我们的研究表明了，二氯乙酸盐作为有可能成为治疗肺高压病人有前景的药物之一，它能有效预防肺高压和肺血管损伤（内膜增殖）的形成，但是对于疾病进展期作用很有限。联合GSK-3β/AKT通路抑制剂有可能增强二氯乙酸盐的疗效，逆转严重的肺血管重构和肺动脉高压。