LIMK1：二烯丙基二硫抑制人胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用靶点

二烯丙基二硫（DADS）是大蒜中的一种脂溶性的有效成分，是一种很有开发潜力的抗肿瘤药物。我们前期工作证实，DADS能体内外明显抑制人胃癌MGC803细胞增殖，并且，蛋白质组学研究DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异蛋白质，发现LIMK明显下调。迄今，尚未见LIMK对DADS抑制人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭作用的研究。本课题在前期研究的基础上，验证DADS处理MGC803细胞的LIMK表达，通过重组细胞系、siRNA、RT-PCR、Real-time PCR、Western blot、激光共聚焦、细胞粘附、细胞迁延、细胞侵袭实验、组织芯片等技术，进一步研究DADS通过下调LIMK抑制人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭，影响Rho1-Rock1-LIMK1-cofilin途径，阐明其分子机制，证实LIMK是作用的关键靶点。

背景与目的：本课题在前期研究二烯丙基二硫（DADS）明显抑制人胃癌细胞增殖与蛋白质组学技术发现DADS诱导人胃癌细胞的差异蛋白质中LIMK明显下调的基础上，证实DADS下调人胃癌细胞LIMK表达，通过构建LIMK1高表达和低表达人胃癌细胞、Real-time PCR、Western blot、流式细胞术、细胞迁延、细胞侵袭、裸鼠成瘤实验、组织芯片等技术，进一步研究DADS通过Rac1-Rock/Pak1通路，下调LIMK1，抑制人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭，阐明其作用的分子机制，证实LIMK1是DADS抑制人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用的关键靶分子。结果：DADS可明显抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭，其机制与阻断Rac1-Rock1/Pak1通路下调LIMK1，减少cofilin1磷酸化有关。沉默LIMK1可降低cofilin1磷酸化水平，抑制人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭和增强DADS抑制作用，而LIMK1高表达可增加cofilin1磷酸化水平，促进人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭和削弱DADS的抑制作用。裸鼠成瘤实验显示，DADS可显著抑制移植瘤生长，沉默LIMK1不仅抑制移植瘤生长，而且可增加DADS的作用，然而，LIMK1高表达可促进移植瘤形成和削弱DADS的抑制作用。LIMK1高表达组的Vimentin、Ki-67、CD34和P53蛋白的表达均明显增加，而LIMK1沉默组与DADS处理各组Vimentin、Ki-67、CD34和P53表达明显降低，但E-cadherin在各组表达无明显差异。组织芯片显示LIMK1在胃癌中高表达与胃癌发生、转移和临床分期有关。结论：DADS可通过Rac1-Rock1/Pak1通路下调LIMK1与降低p-cofilin1抑制人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭，LIMK1可能是DADS作用的靶点。