从RA信号途径探讨电针促进内源性神经干细胞分化机制的研究

缺血中风是当前脑血管病中病死率和致残率最高的疾病之一。针灸对缺血中风有着良好的治疗效果，但作用机制尚不清楚。本研究通过大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO），以电针作为干预措施，通过神经功能评估观察动物的神经功能症状，通过光镜下观察其脑组织病理改变，采用免疫荧光双标技术观察电针干预后MCAO大鼠模型内源性神经干细胞的迁移情况，初步阐明维甲酸（Retinoic Acid，RA）信号在MCAO模型大鼠脑内侧脑室的室管膜下区GFAP阳性干细胞分化迁移的调控中的作用，探讨电针治疗脑梗死对内源性神经干细胞分化的作用途径，为电针的临床应用提供理论依据和实验基础。

方法：将288只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组。通过线栓法建立大脑中动脉梗塞模型（MCAO），使用Homecage Scan监测系统观察大鼠神经功能变化，TTC染色评价脑梗死体积，免疫荧光技术观察神经干细胞增殖、分化情况，Western blot及RT-PCR法检测大鼠脑组织Raldh1、2各亚型蛋白及mRNA的表达。结果：⑴神经功能及脑梗塞体积的变化：针刺组在术后第7、14天与模型组比较有显著性差异（P＜0.05），第1、28天两组比较无显著性差异（P＞0.05）。⑵神经干细胞增殖、分化情况：缺血再灌注后第1天，室管膜下区Brdu+细胞开始增加，第7天明显增多，达到峰值，14天后逐渐减少，至28天接近正常水平；针刺组第7、14天Brdu较相同时段模型组明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)，第1、28天两组间Brdu比较无显著性差异（P＞0.05）；梗死灶周BrdU+/GFAP+细胞数在第7天开始增加，第14天达到峰值，之后逐渐减少，纹状体区BrdU+/NeuN+细胞数在第7天开始增加，随着时间的推移，BrdU+/NeuN+细胞数逐渐增多，两组间在各观测时间点BrdU+/GFAP+、BrdU+/NeuN+细胞数比较无显著性差异（P＞0.05）。⑶RA蛋白及RA mRNA的表达：模型组及针刺组Raldh1mRNA、Raldh2 mRNA的表达在术后第7天升高，第14天达到高峰，之后表达减少，至第28天趋于正常；针刺组、模型组第1、28天Raldh1mRNA、Raldh2 mRNA的表达同假手术组比较无显著性差异；针刺组、模型组第7、14天Raldh1mRNA、Raldh 2 mRNA的表达同假手术组比较有显著性差异（P＜0.05）；针刺组第7、14天的Raldh1mRNA、Raldh2 mRNA的表达同模型组比较有显著性差异（P＜0.05）；Raldh1、Raldh2蛋白的表达模式与Raldh1mRNA、Raldh2 mRNA的表达模式类似。结论：电针能改善脑梗塞大鼠的神经功能，减少脑梗塞体积，促进神经干细胞的增殖，其机制可能与调控RA的表达有关。